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目的:通过在人胶质瘤细胞系U87和U251的培养基中添加中草药提取物芍药苷(paeoniflorin),观察芍药苷对人胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响,并寻找该药引起胶质瘤细胞生物学行为改变的作用靶点和相关分子机制。方法:1.培养U87、U251细胞,并在培养基中添加不同浓度的芍药苷,CCK-8法检测各浓度芍药苷对细胞增殖的影响。2.划痕实验检测芍药苷对胶质瘤细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测芍药苷对胶质瘤细胞侵袭能力的影响。3.经不同浓度的芍药苷处理后,通过Western Blot检测各组细胞中迁移侵袭相关蛋白(MMP-2、MMP-9)、间质细胞mark蛋白(N-cadherin、snail、vimentin、zeb-1)、紧密连接蛋白(claudin-1、zo-1)表达量的变化,并通过RT-qPCR和Western Blot法检测TGF-β在基因和蛋白水平上表达的变化。4.用携带TGF-β基因的慢病毒载体感染胶质瘤细胞,再通过嘌呤霉素筛选出可以稳定表达TGF-β的细胞,(并通过Western Blot检测转染效果),用于后续实验。5.运用CCK-8法、划痕实验和Transwell实验检测过表达的TGF-β能否抵消芍药苷对胶质瘤细胞生物学行为的影响,并通过Western Blot方法检测上述相关蛋白表达水平的变化。6.用U87细胞构建裸鼠移植瘤,成瘤后将裸鼠随机分成两组,一组给予PBS溶液,另一组给予芍药苷溶液,每4天观察一次移植瘤的大小,36天后处死裸鼠并取出肿瘤,并用Western Blot法检测两组裸鼠移植瘤内相关蛋白的表达量。结果:1.CCK-8法检测显示:在15mM、20 mM浓度时芍药苷对U87、U251细胞的增殖产生了抑制,浓度为5mM、10mM时,增殖抑制不具有统计学意义。2.用0 mM、5mM、10 mM浓度芍药苷共培养U87、U251细胞,划痕实验和Transwell结果显示芍药苷可以抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭,且抑制程度均与药物浓度呈正比。3.Western Blot显示:芍药苷可以下调MMP-2、MMP-9、N-cadherin、snail、vimentin、zeb-1蛋白的表达,上调claudin-1、zo-1蛋白的表达。此外,芍药苷还可以使细胞中TGF-β在mRNA和蛋白表达水平上下降。4.划痕实验和Transwell结果显示:U87和U251细胞中TGF-β的过表达可以增强肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。5.Western Blot显示,U87和U251细胞中TGF-β的过表达可以促进MMP-2、MMP-9、N-cadherin、snail、vimentin、zeb-1蛋白的表达,并抑制claudin-1、zo-1蛋白的表达。6.裸鼠成瘤实验及Western Blot结果显示,芍药苷组中移植瘤的体积明显小于PBS组,且芍药苷组中claudin-1和zo-1蛋白的表达量高于PBS组,MMP-2、MMP-9、N-cadherin、snail、vimentin、zeb-1和TGF-β的表达量均低于PBS组。结论:1.芍药苷能够抑制胶质瘤U87、U251细胞的迁移、侵袭能力。2.芍药苷通过作用于胶质瘤细胞中的TGF-β,影响下游多种效应蛋白的表达,以阻止胶质瘤细胞的上皮间质转化,进而抑制胶质瘤细胞的迁移侵袭能力。3.芍药苷可以通过相同的作用机制抑制体内胶质瘤的生长。