增生性玻璃体视网膜病变增殖细胞Fas、Fas配体表达与凋亡及炎前因子对培养的人视网膜色素上皮细胞Fas、Fas配体表达的调控

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目的 孔源性视网膜脱离并发的增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)为一系列的细胞活动,即去分化细胞的形成、迁移、粘附及增殖,沿脱离的视网膜形成表面膜并收缩,导致视网膜脱离手术失败。PVR是一过度的伤口愈合过程,存在细胞增殖和死亡的失衡。视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞是主要的增殖细胞,炎前因子在增生性玻璃视网膜病变发病中有重要作用,本实验主要包括以下两部分:(1)检测PVR玻璃体切除液和增殖膜标本中细胞组成及来源,是否存在凋亡,Fas和FasL表达与凋亡的关系。(2)观察IL-1β和TNF-α对培养的人RPE细胞生长、增殖以及Fas、FasL、波形蛋白表达的影响,了解PVR中炎前因子的调控机制。 方法 (1)对11例PVR新鲜玻璃体切除液标本细胞离心涂片和12例增殖膜标本进行形态学观察,免疫组织化学检测中间丝蛋白,即CK、波形蛋白、GFAP和NF,同时检测Fas和FasL表达。TUNEL技术检测凋亡细胞。一例玻璃体切除液离心细胞经透射电镜观察。(2)通过MTT比色实验和~3H-TdR掺入实验检测IL-1β和/或TNF-α对培养的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响。流式细胞仪检测暴露于IL-1β和/或TNF-α的RPE细胞Fas、FasL的表达,并用mRNA斑点杂交分析mRNA的改变。免疫组织化学
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