鳊鲂属鱼类形态学与遗传结构研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qdgong
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鳊(Parabramis)属鲂属(Megalobrama),隶属于鲤形目(Cypriniformes)、鲤科(Cyprinidae)、鲌亚科(Culterinae),鳊属常见的仅鳊(Parabramispekinensis)1个种,鲂属包括鲂(M.skolkovii),广东鲂(M hoffmanni),厚颌鲂(M pellegrini),团头鲂(M amblycephala)4个种,广泛分布于我国长江、珠江、黄河、黑龙江、钱塘江、闽江以及海南岛等江河湖泊中,是我国主要的淡水经济鱼类,形态及生物学特征十分相似,本研究从形态学和分子遗传学两个方面对鳊鲂属鱼类进行研究,主要结果与结论如下:1.鳊鲂属鱼类形态学比较分析本研究通过对鳊鲂属446尾样本的23个可数性状,41个可量比例性状采用多元统计分析,探讨鳊鲂属形态差异。结果显示,可数性状(总脊椎数),可量比例性状(腹鳍棘长/头长、体高/体长、尾柄高/体长、4-5/体长、4-7/体长、尾柄长/尾柄高)在5种鱼之间存在显著性差异(P<0.05)可作为5种鲂的判别性状。可数性状主成分分析构建3个主成分,贡献率分别为:31.90%、17.12%、10.28%,累计贡献率达59.30%。可量比例性状主成分分析构建3个主成分,贡献率分别为:23.83%、12.18%、9.86%,累计贡献率达45.87%。可数性状主成分散点图显示,鳊形成较为独立的1簇(cluster),与鲂属区分明显;鲂属4个种中,鲂聚成独立1簇,与其它鲂明显区分;广东鲂也形成较明显的簇,与鲂完全分离,与厚颌鲂几乎不重叠,与团头鲂较少部分重叠;厚颌鲂与团头鲂重叠较多,不易区分。可量比例性状主成分分析显示鳊与鲂属鱼类重合较少,聚为独立的1簇。鲂属4个种,广东鲂聚成独立1簇,与其它鲂明显区分;鲂也形成较明显的簇,与广东鲂完全分离,与团头鲂较少部分重叠,与厚颌鲂混杂在一起;厚颌鲂与鲂、团头鲂重叠较多,不易区分。可数性状聚类分析显示广东鲂与厚颌鲂最先聚为一支,而最后与鳊聚在一起,说明鳊与鲂属鱼类在可数性状上差异最大,鲂属中鲂与其它3个种的可数性状差异最大。可量比例性状聚类分析显示鲂与其它4个种区别最大,其次为鳊,团头鲂和厚颌鲂最为接近。将鳊鲂属41个可量比例性状采用Bayes逐步判别分析构建了 5个种的判别函数,鳊鲂属5个群体综合判别率为98.21%。2.鳊、鲂鱼类不同地理群体形态学比较分析采用传统形态学和框架分析法,运用单因素方差分析、聚类分析、主成分分析和判别分析法对鳊梁子湖、斧头湖、长江、黑龙江4个地理群体184尾样品的35个形态比例性状进行比较研究,鲂北江、钱塘江、金沙河水库、黑龙江4个地理群体472尾样本的37个形态比例性状进行比较研究。单因素方差分析显示:鳊4个群体的全长/体长、口裂长/头长、眼径/头长、背棘长/头长、胸棘长/头长、腹棘长/头长、臀棘长/头长、1-2/体长、1-3/体长、2-3/体长、3-5/体长11个性状部分群体间差异显著(P<0.05);而鲂4个群体的全长/体长、头长/体长、尾柄长/体长、尾柄高/体长、口裂长/头长、吻长/头长、口宽/头长、1-2/体长、1-3/体长、3-5/体长、4-5/体长、4-6/体长、5-6/体长、6-8/体长、6-9/体长、7-8/体长、7-9/体长17个性状差异显著;聚类结果显示,鳊梁子湖与斧头湖群体首先聚为一类,最后与黑龙江群体聚在一起,表明梁子湖与斧头湖群体形态最为相似,与黑龙江群体形态差异最大,鲂北江与金沙河水库首先聚为一类,最后与黑龙江群体聚在一起,认为北江群体与金沙河水库群体形态最为相似,与黑龙江群体形态差异最大;主成分分析显示:鳊构建了7个主成分,累计贡献率为60.97%,鳊构建了 10个主成分,累计贡献率为61.82%;主成分散点图显示:鳊黑龙江群体成为独立的1簇,鲂黑龙江与钱塘江成为独立的2簇;以Bayes逐步判别分析方法:鳊采用15个判别效果较好的比例性状建立了 4个鳊地理群体的判别函数,判别率为89.13%,鲂采用18个判别效果较好的比例性状建立了 4个鲂地理群体的判别函数,判别率为99.58%,研究显示,可以通过形态比例性状来判断鳊、鲂的4个地理群体的归属。3.分子遗传学标记的开发及遗传学分析鲂、广东鲂、厚颌鲂、鳊通过基因组数据共获得可设计微卫星引物的序列132637条、162135条、164571条、152997条,其中2碱基所占比例最高(51.17%,48.23%,48.15%,48.95%)。共计合成引物1047对(其中鲂380对,广东鲂285对,厚颌鲂192对,鳊190对),鲂中26个微卫星位点呈现多态,广东鲂中37个微卫星位点呈现多态,厚颌鲂中29个微卫星位点呈现多态,鳊中30个微卫星位点呈现多态。分子方差分析(AMOVA)表明,遗传变异中群体个体间变异所占比例较大,鳊和鲂群体内遗传变异占总遗传变异的比例分别为86.62%和86.62%。鳊4个地理群体中,黑龙江群体遗传多样性最高,梁子湖最低;鲂4个地理群体中黑龙江群体最高,北江群体最低。鲂4个地理群体Nei’s遗传距离聚类显示北江与金沙河水库群体距离最近,而与黑龙江群体距离最远;Structure结构分析显示鲂呈现4个结构不同的群体。鳊4个地理群体Nei’s遗传距离聚类显示长江与斧头湖群体距离最近,而与黑龙江群体距离最远;Structure分析显示鳊呈现4个结构不同的群体。鲂、广东鲂、厚颌鲂、鳊的多态性引物在其它4个种跨种扩增,显示鲂在团头鲂、广东鲂、厚颌鲂、鳊中的通用率分别为88.46%、80.77%、73.08%、92.31%;广东鲂在团头鲂、厚颌鲂、鲂、鳊中的通用率分别为81.08%、81.08%、91.89%、89.19%;厚颌鲂在团头鲂、广东鲂、鲂、鳊中的通用率分别为96.55%、86.21%、86.21%、75.86%;鳊在团头鲂、广东鲂、厚颌鲂、鲂中的通用率分别为83.33%、83.33%、70%、96.67%。我们可以通过引物扩增产物目的条带的有无和条带大小对这5种鱼进行区别(如:HHF-63、HHF-104、HHF-113、HHF-148、HHF-163)。4.基于重测序的鳊鲂属鱼类基因组序列分析构建的鲂、广东鲂、厚颌鲂和鳊的测序文库测序数Q20均在95%以上,Q30均在90%以上,测序深度35×以上。通过与NT库比对,显示样品不存在外源物种污染,通过与线粒体数据比对,显示线粒体含量低;鲂、广东鲂、厚颌鲂、鳊基因组大小分别约为 0.98 Gb,0.99 Gb,1.00Gb,0.99 Gb,杂合率分别约为 0.49%,0.49%,0.37%,0.47%,重复序列含量分别约为 46.17%,41.85%,44.05%,40.80%。杂合率和重复率均较低,说明4个样品均属于较简单的基因组的物种。以团头鲂基因组为参考基因组,鳊的reads的比对率最低(96.48%),鲂、广东鲂、厚颌鲂比对率依次为98.32%、99.54%、99.64%。在团头鲂基因组范围内,在鲂、广东鲂、厚颌鲂、鳊文库中共得到7,624,328、13,978,887、8,971,456、16,790,911个单核苷酸的多态性(SNP)位点,并对其进行功能注释。短片段插入或缺失(Short InDel)变异所分布的功能注释结果显示17107个位点的Short InDel在4个种中均存在变异,76个Short InDel位点仅在鲂存在变异,254个Short InDel位点仅在广东鲂中存在变异,127个Short InDel位点仅在厚颌鲂中存在变异,464个Short InDel位点仅在鳊中存在变异。检测到鲂、广东鲂、厚颌鲂、鳊的结构性变异(SV)分别为92,782个,21,575个,150,639个、140,293个。鲂、广东鲂、厚颌鲂、鳊拷贝数变异(CNV)分别为11,375个、11,359个、11,957个、9,419个。根据SNPs采用近邻结合法(NJ)构建进化树,可见广东鲂与鳊首先聚为一簇,再与厚颌鲂聚在一起,最后再与鲂聚在一起,说明广东鲂与鳊基因组较为接近,与鲂差异最大。
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