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目的:(1)基于CRISPR/Cas9基因编辑技术构建敲除SLC5A8基因敲除模型;(2)观察SLC5A8基因敲除模型C57负瘤鼠黑色素瘤微环境细胞免疫功能的变化;(3)观察SLC5A8基因敲除模型鼠外周血及淋巴结器官T淋巴细胞亚群的变化;(4)观察SLC5A8基因敲除模型鼠器官结构的变化;(5)明确SLC5A8基因在器官水平的抗肿瘤作用机制。方法:(1)采用CRISPR/Cas9技术构建SLC5A8基因敲除模型并鉴定;(2)实验分组:C57小鼠各4只分三组,即敲除SLC5A8基因负瘤鼠为实验组(KO组)、普通负瘤鼠为对照组(WT组)、空白对照组(Control组)。各组小鼠周数均为8-12周,体重18-22g,雌性。负瘤鼠模型均采用C57小鼠腹部皮下种植恶性黑色素瘤B16细胞的方法构建。(3)观察并记录实验组和对照组肿瘤的生长状况,包括肿瘤体积的变化、负瘤鼠瘤重等;计算肿瘤体积抑制率、肿瘤瘤重抑制率并绘制时间-生长曲线;(4)采用流式细胞技术检测实验组和对照组肿瘤微环境中T淋巴细胞亚群水平;检测实验组、对照组、空白对照组外周血及淋巴结器官T淋巴细胞亚群水平;分析SLC5A8基因对肿瘤微环境细胞免疫的影响;(5)采用HE染色的方法观察各组小鼠肿瘤组织结构的变化;观察并分析各组小鼠器官结构的变化。结果:(1)采用CRISPR/Cas9技术成功构建SLC5A8基因敲除模型。(2)黑色素瘤生长状况:实验组较对照组,肿瘤生长更快、体积更大,肿瘤重量明显增加(P<0.01)。(3)CD4+所占比例水平:肿瘤微环境中,实验组较对照组CD4+明显下降(P<0.01);在外周血、肿瘤引流淋巴结、脾脏、胸腺中,实验组均明显低于空白对照组,有显著性差异(P<0.01);除胸腺外,对照组均低于空白对照组(P<0.05);除外周血外,实验组均低于对照组(P<0.05)。(4)CD8+所占比例水平:肿瘤微环境中,实验组较对照组CD8+显著下降(P<0.01);肿瘤引流淋巴结中实验组较其余两组均明显降低(P<0.01);脾脏中实验组和对照组较空白对照组降低(P<0.05);胸腺中实验组和对照组较空白对照组均增高(P<0.05)。(5)CD4+/CD8+比值水平:在外周血、肿瘤引流淋巴结、脾脏、胸腺中,实验组和对照组较空白对照组降低(P<0.05),其中实验组最为显著(P<0.01)。在肿瘤引流淋巴结、脾脏、胸腺中实验组较对照组降低(P<0.05)。(6)CD4+&CD8+比值水平:在C57小鼠胸腺中实验组和对照组较空白对照组均明显降低(P<0.01),实验组较对照组降低(P<0.05)。(7)HE染色:(1)肿瘤:实验组肿瘤细胞呈现程度更深的异型性,细胞密度不均,细胞结构复杂、形态多样,大量炎细胞浸润。(2)结肠:实验组结肠粘膜结构完整性损伤,排列紊乱,部分隐窝消失,并见大量炎性细胞浸润,粘膜下水肿,结肠肌层增厚明显,粘膜呈炎症反应表现。对照组粘膜炎症轻微。(3)胃:实验组胃粘膜轻度水肿,细胞排列不规整,粘膜下少量炎性细胞浸润。(4)肺脏:实验组肺脏肺泡腔扩大,肺泡壁增宽,可见个别肺泡融合,部分肺泡代偿性扩张,肺泡间质少量炎性细胞浸润。(5)肝脏和肾脏:各组未见明显差异。结论:(1)敲除SLC5A8基因能降低C57负瘤鼠外周血及肿瘤引流淋巴结、脾脏、胸腺的细胞免疫(T淋巴细胞亚群)功能。(2)敲除SLC5A8基因影响了C57小鼠结肠等多种器官结构的变化,可能是通过影响微环境破坏了组织器官的免疫屏障,进一步导致器官的炎性病变。(3)SLC5A8基因可能通过影响C57负瘤鼠肿瘤微环境的细胞免疫(T淋巴细胞亚群)功能实现对C57负瘤鼠肿瘤细胞生长、增殖的抑制作用。