第一部分:探讨胆道闭锁全身及肝门局部的免疫特征目的:胆道闭锁（BA）是一种涉及先天和适应性免疫反应,以进行性肝炎症和纤维化为特征的新生儿疾病。胆道闭锁的局部和全身免疫反应的机制目前仍不清楚。本研究的目的是定量分析胆道闭锁患儿肝门淋巴结局部及外周血中TBNK淋巴细胞比例的变化,探讨全身及肝门局部的免疫特征。方法:我们采用流式细胞术和免疫荧光技术检测了手术期间获得的肝门、肠系膜淋巴结（LNs）和外周血（PB）标本中各种免疫细胞类型的百分比变化。结果:我们的流式细胞仪数据显示,BA患者在LNs和PB中自然杀伤（NK）细胞的比例均增加。BA患者肝门淋巴结内CD8+T细胞比例较高,肠系膜淋巴结内CD4+T细胞比例较低。胆总管囊肿患儿的肝门淋巴结与肠系膜淋巴细胞的T、B和NK淋巴细胞比例无显著统计学差异。免疫荧光显示,肝门淋巴结的CD4、CD25和Foxp3的表达低于配对的肠系膜LNs。结论:BA患儿外周血及淋巴结中的NK细胞比例升高;BA组肝门淋巴结中CD4+T淋巴细胞比例降低,CD8+T淋巴细胞比例升高,CD4/CD8细胞比例明显降低。第二部分:探讨胆道闭锁肝脏不同病理分期的免疫微环境的差异目的:旨探讨胆道闭锁肝脏不同病理分期的免疫微环境差异。方法:在基因表达综合（GEO）数据库收集包含胆道闭锁（BA）肝活检病理信息的基因芯片数据及在Imm Port数据库下载免疫相关的基因集,利用生物信息学方法分析胆道闭锁发展中的免疫相关的基因、浸润的免疫细胞及激活的通路。结果:通过差异分析得到13个免疫相关的基因,其中MMP9、IL1RL1、MPO、CCL20、PTX3、HSPA6和CTSG主要在炎症组中高表达,RASGRP1、SEMA6A、CXCL11、GREM1和CD8A在纤维化组中高表达。Immu Cell AI分析提示在肝纤维化组中（图2D）显示n Treg及i Treg细胞呈高表达,NKT细胞及中性粒细胞在炎症组中高表达。GSEA分析显示炎症组激活代谢及细胞信号传导相关的分子途径,纤维化组激活的主要是细胞基质及T细胞介导的适应性免疫反应相关的分子途径。结论:免疫微环境在胆道闭锁的发生和发展中起重要作用,有助于阐明胆道闭锁发病机制及为胆道闭锁治疗提供新的方向。