论文部分内容阅读
目的研究有丝分裂早期抑制蛋白1(Early mitotic inhibitor-1, Emil)在我国好发的肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)中的表达情况及其在肝癌细胞增殖中的作用与机制。方法1.采用western blot技术检测8例HCC及癌旁组织中Emil的表达情况;采用免疫组化方法检测114例HCC及癌旁组织切片中Emil和增殖指标Ki-67的表达情况,并结合肝癌临床病理资料分析Emil与HCC患者的年龄、性别、肿瘤分级和转移以及血清AFP等因素之间的关系,并对上述病例进行随访,应用Kaplan-Meier法分析HCC患者生存率,同时用单因素和Cox危险比例模型多因素分析Emil与HCC预后的关系。2.采用血清饥饿/释放同步化处理HuH7、SMMC-7721细胞,用流式细胞仪检测HuH7、SMMC-7721细胞周期的变化,western blot检测在此过程中Emil的表达变化。分别构建siRNA和过表达质粒转染HepG2和SMMC-7721细胞,用流式细胞仪检测上述细胞的细胞周期变化,CCK-8检测细胞的增殖情况的改变,western blot检测上述过程中Emil调控的相关蛋白的表达变化。结果1.免疫组化及western blot分析显示,Emil在HCC中的表达明显高于癌旁肝组织。Emil的表达强度与HCC分化程度(p=0.001)、肿瘤分级(p=0.002)之间的关系有统计学意义,相关性分析表明Emil与Ki-67表达呈正相关(r=0.22;p<0.01)。Kaplan-Meier分析显示Emil在HCC中的高表达与患者总生存率的降低显著相关(p<0.01)。单因素分析表明Emil与HCC病人的不良预后有关(p=0.000)。Cox危险比例模型分析显示Emil可做为HCC预后的独立指标(p=0.030)。2.血清饥饿造成HuH7、SMMC-7721细胞生长周期停滞,血清释放后刺激HuH7、SMMC-7721细胞增殖,Emil蛋白表达增加。siRNA干预细胞后分析显示,Emil缺失可引起细胞增殖的下降以及细胞周期的阻滞,并且cyclinA、cyclinB、Skp2蛋白表达下降,p27kiP1蛋白表达升高。而过表达Emil显示细胞增殖明显增加,细胞周期S期比例升高,并且cyclinA、 cyclinB、Skp2蛋白表达增加,p27kiP1蛋白表达下降。结论1. Emil在HCC中高表达,并且可作为HCC患者独立的预后指标,提示Emil可能与肝癌的发生发展相关。2.在肝癌细胞增殖过程中,Emil表达上调,可能通过抑制APC/C的活性,从而促进其底物cyclinA、cyclinB、Skp2的增加,促进细胞周期进程。