乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率与发病率在女性肿瘤中均居第一。随着现代医疗水平的发展,乳腺癌的五年生存率得到了一定水平的提升,但仍不能彻底治愈,它依然是威胁着世界女性身心健康的主要肿瘤疾病。而在乳腺癌的发展过程中,复发和转移是其死亡的主要原因。现研究表明,肿瘤的复发和转移可能与肿瘤干细胞存在一定的关系。肿瘤干细胞是肿瘤细胞中极少的一部分,并被认为具有始动能力的肿瘤细胞,现已证实,乳腺癌中包含乳腺癌干细胞。它具有自我更新和向肿瘤细胞分化的能力,具有高度的成瘤性。除此之外,肿瘤干细胞对化疗和放疗具有一定的抵抗作用,传统的放疗和化疗只能杀死普通的肿瘤细胞,对肿瘤干细胞作用极小,残存极少数的肿瘤干细胞在发展中可以高度成瘤导致肿瘤的复发和转移。我们实验主要是针对乳腺癌肿瘤干细胞分化进行探讨。阿来西定(AD)早在文献中报道,一定浓度可以促进喉颈肿瘤细胞的凋亡,被认为有可能用来治疗肿瘤。与我们合作的美国实验室前期研究发现,AD可以抑制一种线粒体酪氨酸磷酸酶PTPMT1的活性,抑制PTPMT1的活性可以导致胚胎干细胞分化受阻。由此我们设想在乳腺癌中抑制PTPMT1的活性是否可以抑制乳腺癌干细胞分化,从而使肿瘤转化为慢性疾病,所以实验使用AD来慢性诱导以抑制PTPMT1的活性,验证我们的设想。盐霉素(S)被认为在小鼠体内可以抑制肿瘤的生长,靶向乳腺癌干细胞,降低肿瘤干细胞的自我更新能力。因为肿瘤干细胞具有向肿瘤分化和自我更新两大特点,首先AD抑制肿瘤干细胞向肿瘤细胞分化将恶性肿瘤转化为慢性疾病,随后S可以靶向肿瘤干细胞,所以我们设想将S和AD联合使用是不是可以得到更好的效果,实验结果如下:体外实验显示,通过凋亡和MTT实验AD可以促进乳腺癌细胞的凋亡,并抑制其细胞活力。研究报道EMT与肿瘤干细胞有关,Western-blot分析小剂量AD慢性诱导乳腺癌细胞后相关EMT样标记物表达增高,提示恶性程度增加。生物学行为实验显示小剂量AD慢性诱导后其平板克隆形成能力、软琼脂形成能力、迁移能力均增加,ALDEFLUOR实验证实经AD慢性诱导后其干细胞比例增加,而联合使用S后其恶性生物学能力明显降低。体内实验显示,动物实验AD体内慢性诱导可以抑制肿瘤的生长,但停药后出现反弹。将AD诱导得到的乳腺癌细胞和对照组细胞进行稀释细胞数小鼠成瘤实验,经诱导后的E0771在5*104细胞数仍可成瘤,同样提示干细胞比例增加。为了更进一步验证,进行体内实验,最后我们建立E0771小鼠乳腺癌移植瘤模型,模拟乳腺癌晚期治疗,联合使用AD和S后肿瘤明显减小,二次成瘤结果显示联合使用组肿瘤较其他组仍生长缓慢,瘤体较小。联合使用不但抑制肿瘤生长,而且降低肿瘤干细胞数量,达到了更好的效果。为了进一步探讨乳腺癌细胞恶性生物学行为及干细胞发生改变的分子机制,通过western-blot发现,正常乳腺细胞MCF-10A中PTPMT1表达明显高于乳腺癌细胞。随后我们又收集临床乳腺癌标本和癌旁标本,通过免疫组化证实PTPMT1在癌旁组织中的表达同样高于乳腺癌组织,说明PTPMT1活性的缺失促进了肿瘤的恶化。由以上实验结果我们得出联合使用AD和S可以将恶性肿瘤转化为慢性疾病,并且降低肿瘤干细胞比例,这一研究可能为乳腺癌的治疗提供新的研究方向。