【摘 要】
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为了探讨神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs)对阿尔茨海默病(Alzheimers Disease,AD)治疗的新途径,该实验首先用ALZET微型渗透泵(mini-osmotic pumps)侧脑室内慢性灌注Okada
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为了探讨神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs)对阿尔茨海默病(Alzheimers Disease,AD)治疗的新途径,该实验首先用ALZET微型渗透泵(mini-osmotic pumps)侧脑室内慢性灌注Okadaic acid(OA)建立AD动物模型,用Bielshowsky镀银法和硫磺素-S法分别检测神经原纤维缠结(Neurofibrillary Tangles,NFTs)和老年斑(Senile Plaque,SP)形成;用Lashley水迷宫实验检测大鼠学习、记忆能力;用开场实验检测大鼠探究活动能力和紧张度.然后在体外(in vitro)对神经干细胞进行分离、培养、克隆和鉴定,并用携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和神经生长因子(nerve growth factor,NGF)基因的重组腺相关病毒(Adeno-Associated Virus,AAV)感染神经干细胞,探索不同滴度重组腺相关病毒的感染效率;将体外标记的NSCs移植到正常及AD模型大鼠脑内,也将携带GFP基因和NGF基因的NSCs移植到AD大鼠大脑皮层和海马区内,观察它们在脑内的存活情况以及对AD大鼠的治疗作用.该研究通过ALZET微型渗透泵,向大鼠的侧脑室内慢性灌注OA达56天以上,不仅可以引起SP沉积和NFTs形成,而且可以导致大鼠的学习记忆能力和探索能力下降.证明它是一种成功建立Alzheimers病动物模型的方法.该研究还成功利用无血清培养技术,从胚胎大鼠海马和成体大鼠海马和室管膜下区获得大量的NSCs,掌握了从神经球中纯化神经元前体细胞和在体外利用非遗传方式建立NSCs系的方法.探索了不同滴度的重组rAAV2病毒体外感染NSCs的感染效率.观察到携带有外源性NGF基因的NSCs被移植到AD大鼠脑内后,不仅能良好的存活,而且对AD大鼠行为学变化产生影响.
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