油菜籽生育酚和脂肪酸组分相关性研究及调控生育酚合成关键基因的等位多态性分析

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油菜(尤其是甘蓝型油菜)是当今世界上最重要的油料作物之一。菜籽油的营养品质主要取决于其脂肪酸的相对组成。高油酸和高亚油酸的脂肪酸构成由于兼顾植物油营养与煎炒的优点而更受人们所青睐。除脂肪酸的构成以外,菜籽油中维生素E的含量及组成(高维生素E总含量和高α-/γ-生育酚比率)也是菜籽油脂品质评价的重要指标。维生素E是一种只能由光合生物合成的脂溶性维生素,其存在可以有效的防止动植物体内多不饱和脂肪酸的过氧化。维生素E的适当摄入为人类和其它多数哺乳动物维持自身正常生理功能所必需。其适当摄入可以有效预防心血管疾病,其摄入的缺乏会诱导神经功能障碍、肌肉萎缩等病症的发生。维生素E包括生育酚和三烯生育酚两大类。两类生育酚类物质均具有维生命E生物活性。在种子油脂(例如菜籽油)当中,以生育酚的含量居多,三烯生育酚则较少或难以检测。依据芳香环上甲基的数目和位置不同,生育酚又可划分为α-、p-、丫-、δ-四种亚型。四种亚型生育酚当中以α-型的维生素E生物活性最高;就食用油中的抗氧化能力而言,则以γ-型最强。集高油酸、亚油酸、高α-/γ-生育酚比率以及高总生育酚含量等众多优良品质于一身的菜籽品质是现代油菜育种的重要目标。然而,目前有关菜籽中脂肪酸与生育酚组分相互关系的研究报道尚不多见。以植物生育酚合成途径中的关键酶基因作为候选基因来研究该些关键基因的等位多态性及其与籽粒生育酚品质相互关系的研究亦鲜有报道。鉴于上述现状,本论文的研究主要基于以下两方面展开,其主要内容与结论如下:以收集到的具有广泛变异的,来自甘蓝型、白菜型以及芥菜型三个种的油菜种质资源(其中162份为地方品种,15份为低芥酸选育品种)为材料,研究了菜籽中脂肪酸与生育酚组分的相关性。经统计分析发现,在三个由地方品种所组成的种群材料之间存在着一些显著的共同规律:a-T与C18:1+C18:2均呈现出显著的正相关,与C18:3以及VLCFA均未呈现出显著的正相关;γ-T与所有的脂肪酸组分几乎均未呈现出显著的相关性。结果表明a-T与脂肪酸组分的相关性可能并非基于生育酚的抗氧化性质,而是可能源自于a-T对脂肪酸内质网上生物合成途径的调控。通过运用25对内含子多态性标记引物检测了83份甘蓝型油菜品种中6个生育酚生物合成途径关键酶基因(BnaX.PDSl.b,BnaX.VTE1.a,BnaA.VTE2.a, BnaX.VTE3.a, BnaX.VTE4.b,BnaC.VTE5)的内含子等位多态性。经PCR扩增和高分辨率凝胶毛细管电泳鉴定,在依据六个候选基因所设计的IP标记引物当中,每个候选基因至少有一对相对应的引物在83份群体材料当中扩增出了3或4个清晰的可识别电泳条带,表明每个候选基因最多可以在甘蓝型油菜中扩增出3或4个拷贝(平均3.83个拷贝)。经基于Q+K模型的关联统计分析,在所有具有显隐性差异的49个基因位点上,最终有6个位点与生育酚性状(总含量或组分构成)产生了显著性关联(P>0.05)。所有具备关联性的位点当中,以分子标记PDS1-IP1(F/R)(329bp凝胶电泳条带)对性状的解析率最为显著,它最多分别导致8.12%的生育酚总含量与5.48%的α-T含量的变异,因此可以直接应用于甘蓝型油菜生育酚品质育种。
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