绵羊卵裂期早期胚胎经历了受精卵形成、合子基因组激活、卵裂球压实等四个阶段,涉及胚胎转录结构的剧烈变化,研究8-细胞、16-细胞、桑椹胚阶段绵羊体外受精胚胎转录组,对了解早期胚胎生长发育规律十分重要。本研究为获得绵羊体外受精胚胎样本进行转录组测序,对绵羊体外受精培养体系进行优化;分别用单细胞裂解液和PicoPure?RNA Isolation Kit获得RNA,筛选有效单个胚胎RNA获取方法,纯化mRNA,将mRNA逆转录成cDNA,Smart-Seq2扩增cDNA构建绵羊IVF 8-细胞、16-细胞、桑椹胚期单个胚胎转录组测序文库,采用Illumina HiSeq Xten高通量测序技术进行转录组测序;筛选不同卵裂期胚胎差异表达基因,进行GO功能分析及KEGG分析。获得结果如下:1.在绵羊卵母细胞成熟培养液中添加10μg/mL的LH卵母细胞的成熟率为76.60%,卵裂率为63.24%,桑椹胚率为30.81%,显著高于添加0μg/mL、5μg/mL、15μg/mL、20μg/mL LH的成熟培养液(P<0.05)。2.用单细胞裂解液裂解绵羊单个胚胎,纯化mRNA,将mRNA逆转录成cDNA,Smart-Seq2扩增cDNA,检测PCR产物浓度均在60 ng以上,cDNA片段大小集中分布在1kbp~2 kbp之间,成功构建绵羊IVF 8-细胞、16-细胞、桑椹胚期单个胚胎转录组测序文库,而采用PicoPure?RNA Isolation Kit提取单个胚胎RNA,检测RNA质量,RIN<1.5且28S/18S<0.2,未满足cDNA扩增要求,无法构建转录组测序文库。3.用DEGSeq软件分析差异表达基因,以FC>2or<0.5且Q-value<0.05为筛选标准,8-细胞VS 16-细胞筛选到170条DEGs,其中上调126条,下调44条;16-细胞VS桑椹胚筛选找到417条DEGs,其中上调47条,下调370条;8-细胞VS桑椹胚筛选到126条DEGs,其中上调36条,下调90条。对差异表达基因进行GO生物功能分析,主要涉及核苷酸化合物合成、代谢调节、有机环化合物生物合成、RNA代谢、化合物代谢等生物过程。对差异表达基因进行KEGG分析结果显示,8-细胞VS 16-细胞DEGs参与到126条通路中,显著富集在癌症中转录失调、Hippo信号通路等11条代谢通路;16-细胞VS桑椹胚DEGs参与到206条代谢通路,显著富集在剪接体、调控干细胞多能性的信号通路2条代谢通路;8-细胞VS桑椹胚DEGs无显著富集代谢通路。