家蝇SVWC蛋白参与抗菌免疫反应的功能研究

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家蝇Musca domestica,是昆虫纲(Insect)双翅目(Diptera)蝇科(Muscidae)的常见昆虫。家蝇的生活周期短,繁殖能力强,对环境表现出很好的适应能力。作为模式生物,研究昆虫生理学和生物化学具有显著的优越性。我们通过家蝇数字表达谱发现一类SVWC(Single domain von Willebrand factor type C)家族基因成员在细菌免疫后表达量上调,将其命名为MdSVWC1(NCBI accession number:XM005175861.3)。本研究以此为出发点对家蝇SVWC进行系统的生物信息分析;同时利用分子生物学手段初步分析MdSVWC1在家蝇抗菌过程中的功能,为后续深入探究SVWC蛋白家族在家蝇免疫过程中扮演的“角色”提供有力证据。本研究主要内容包括:1、利用生物信息手段筛选到28条MdSVWC基因。MdSVWC基因成员ORF普遍较短,大部分成员具有信号肽;在进化过程中,MdSVWC存在基因复制的现象,且具有外显子的插入或删除,但不同成员间外显子、内含子的分布和长度存在差异。2、分析MdSVWC家族蛋白序列发现,该家族成员是一类小分子分泌性蛋白,具有8个保守的半胱氨酸。系统进化分析表明目前鉴定到的MdSVWC蛋白分为8个类群,不同类群蛋白成员的理化性质、二级结构及motif的组成形式存在差异。3、利用实时定量PCR检测MdSVWC1在家蝇不同发育时期、不同组织以及细菌免疫后的表达模式的变化。结果显示不同发育时期MdSVWC1在卵中表达量最高,其次是蛹中表达量较高;不同组织MdSVWC1在脂肪体中表达量最高;细菌刺激家蝇幼虫3 h时MdSVWC1表达上调,其蛋白水平与mRNA水平MdSVWC1表达趋势一致。4、Western blot及显微镜分析可知,在100 mM Ca2+作用下,MdSVWC1能够与革兰氏阴性菌(大肠杆菌)、革兰氏阳性菌(枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌)结合,并促使大肠杆菌、枯草芽孢杆菌凝集。
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