目的肌腱粘连作为手外科领域常见的并发症,一直是困扰着临床医生的难题之一。肌腱粘连的病理特征主要表现为成纤维细胞的过度增殖与活化,大量细胞外基质的沉积。目前,虽然已有大量临床和基础研究探索通过应用药物、物理屏障、康复锻炼等手段来预防肌腱粘连的形成,但是治疗效果不完全令人满意。最近的研究发现,一些小分子的药物也具有一定的抗组织纤维化的作用,比如二甲双胍、雷帕霉素。本课题拟通过开展体内、体外实验,研究二甲双胍、雷帕霉素在抑制肌腱粘连形成过程中的作用及相关机制,为临床寻找防治肌腱粘连的新的靶点提供理论依据。方法第一部分,体外实验采用NIH/3T3小鼠成纤维细胞系,通过给予TGF-β1（2 ng/ml）和/或二甲双胍（5 m M）处理,观察其对相关基因表达以及细胞生理学行为（增殖、凋亡、细胞周期）的作用,并通过Compund C和AMPK si RNA验证二甲双胍的作用是否依赖于AMPK信号通路的激活。体内实验,首先构建大鼠足底深屈肌腱损伤的模型,随后给予二甲双胍（200 mg/kg/d）或者等量PBS灌胃给药21天,通过大体观察、组织学评价、相关基因表达等分析二甲双胍抑制肌腱粘连的作用。第二部分,体外实验给予雷帕霉素（500 n M）处理,验证其对粘连相关基因的表达、细胞凋亡、周期的作用,并通过自噬的抑制剂以及si RNA验证雷帕霉素的作用是否依赖于自噬的激活。随后通过给予肌腱损伤大鼠雷帕霉素（2 mg/kg/d）或等量DMSO腹腔注射,并通过相关指标评价体内雷帕霉素给药对自噬的激活的作用,以及防治肌腱粘连的具体效果。结果成纤维细胞给予二甲双胍处理后,可以抑制TGF-β1诱导的细胞增殖以及col1、col3、α-SMA的表达,而在Compound C和AMPK si RNA干扰AMPK信号通路后,二甲双胍的作用受到显著的抑制。构建大鼠肌腱损伤模型后21天,通过组织学分析显示有明显的肌腱粘连形成。给予大鼠二甲双胍灌胃后,大体观察和组织学分析发现肌腱粘连程度显著减轻,粘连相关基因的表达也明显下调。雷帕霉素处理抑制成纤维细胞col1、col3、α-SMA的表达,同时促进G0/G1期阻滞,抑制细胞增殖;而在应用3-MA、atg5 si RNA抑制自噬激活后,雷帕霉素不能发挥保护作用。肌腱损伤大鼠在雷帕霉素给药后,大体观察、组织学评价、western blot、免疫组化等分析显示,雷帕霉素可以显著改善大鼠肌腱损伤后粘连的形成。结论肌腱损伤后成纤维细胞的活化,细胞外基质的沉积导致肌腱粘连的形成。二甲双胍与雷帕霉素分别通过激活AMPK信号通路以及自噬发挥抑制肌腱粘连形成的作用,具有较高的进一步研究价值,为临床防治肌腱粘连的研究提供了理论基础。