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目的： 观察同病异证H22肝癌小鼠脾脏基因差异表达的特征以及个体化辨证论治对H22肝癌小鼠的疗效及作用机制，探索并建立肝癌小鼠辨证论治量化评价指标体系，比较并优化原发性肝癌的治疗方案，同时揭示脾脏层面肝癌同病异证发生的物质基础。 方法： 1.腋下接种H22肝癌腹水瘤细胞复制小鼠肝癌模型，采用小鼠标准化、计量化诊法和辨证方法，筛选获得同病异证H22肝癌小鼠，即邪毒壅盛证和气虚证肝癌小鼠，以无证候的正常小鼠为对照，综合采用Affeymetrix基因芯片等技术，检测各组小鼠脾脏基因的表达情况，重点分析与脾脏细胞增殖和免疫功能密切相关的细胞周期通路和B细胞受体信号通路基因差异表达的特征，探索脾脏层面同病异证可能存在的物质基础。 2.开展三批相关联的动物实验，采用小鼠标准化、计量化诊法和辨证方法，筛选出不同证候的肝癌小鼠，在最佳西医治疗方案的基础上叠加个体化辨证论治，并引入计量化的证候疗效评价体系。观察治疗对肝癌小鼠带瘤生存时间、生存率、抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数的影响以及对气、血、阴、阳、邪毒等证候的疗效，比较并优化原发性肝癌的治疗方案，筛选出最佳治疗方案。 3.在原发性肝癌最佳治疗方案的基础上，尝试对H22肝癌小鼠进行适度治疗，以避免过度治疗所带来的不良反应，即对体表估测肿瘤小于平均瘤重的小鼠不予实质性的药物治疗，其余小鼠治疗不变，观察疗效的情况。并通过以下研究，探讨辨证论治的作用机制：(1)制作各组小鼠脾脏组织病理切片，HE染色，在显微镜下观察其放大100倍、400倍后，形态组织结构的变化；(2)在前期基因芯片数据分析的基础上，采用RTqPCR技术，观察脾脏细胞周期通路和B细胞受体信号通路上，差异表达明显且功能重要的关键基因的转录水平；(3)采用ELISA技术检测血清IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ等细胞因子水平；(4)采用Westernblot技术，检测脾脏NF-κBP65及CyclinD1蛋白水平。以期进一步揭示肝癌同病异证在脾脏层面的物质基础。 结果： 1.从150只H22肝癌小鼠中，筛选出早期邪毒壅盛证、早期气虚证小鼠各8只，合并RNA样本，每组得到13549个芯片数据，数据分析表明，同病异证肝癌小鼠脾脏细胞周期通路基因差异表达的总体特征为：(1)G1/S期和G2/M期的多数关键基因在肿瘤发生早期明显上调；Ccnd1则表现为显著下调，且在邪毒证的下调趋势更加明显：ORC41在气虚证下调，而在邪毒证略有上调。(2)多数基因表现为邪毒证表达量大于气虚证，包括Cdk4、Ccnb2、Ccna2、Cdc2a等关键的细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶。脾脏B细胞受体信号通路基因差异表达的总体特征为：(1)几乎所有关键基因在肿瘤发生早期均明显下调。(2)邪毒证基因的表达量小于气虚证，尤其是核转录因子Rela和Nfatc1。 2.所采用的小鼠标准化、计量化诊法和辨证方法，有助于开展小鼠个体化辨证论治，及其计量化的疗效评价；根据各项指标综合评价，筛选出中医个体化辨证论治联合介入/索拉非尼为原发性肝癌的最佳治疗方案，结果表明：该综合治疗方案在延长肝癌小鼠生存时间、改善临床证候、提高生存率及抑瘤率方面具有一定优势，对小鼠免疫功能的恢复作用较好。 3.开展对H22肝癌小鼠的适度个体化辨证论治综合治疗，结果表明：该方案能够明显延长肝癌小鼠带瘤生存时间、提高生存率；但抑制肿瘤增长和改善证候的效果不够理想。 病理切片结果显示：肿瘤发生后，脾脏红髓、白髓分界总体不如正常组，其中，对照组脾脏白髓面积及数量有缩小趋势，红髓中巨噬细胞增多；化索组动脉周围淋巴鞘有增厚的趋势；中药组红髓、白髓界限不清，结构凌乱，且白髓基本消失。 RTqPCR结果显示：(1)肝癌小鼠脾脏细胞周期通路G1/S期的细胞周期蛋白Ccnd1表现出下调趋势，与基因芯片结果表达趋势基本一致，治疗后略有上调；细胞周期蛋白依赖性激酶Cdk4表达量无明显变化，治疗后有所上调；微小染色体维持蛋白家族成员Mcm2表现出上调趋势，与基因芯片结果表达趋势基本一致，治疗后有下调趋势。(2)肝癌小鼠脾脏细胞周期通路G2/M期的细胞周期蛋白Ccnb2、Ccna2与细胞周期蛋白依赖性激酶Cdc2a均出现上调趋势，与基因芯片结果表达趋势基本一致，治疗后，均表现出不同程度的下调趋势。(3)肝癌小鼠脾脏B细胞受体信号通路的重要连接蛋白Blnk及核转录因子Rela、Nfatc1出现下调趋势，与基因芯片结果表达趋势基本一致，治疗后，Blnk及Nfatc1表现出不同程度的上调，Rela则无明显改变。 ELISA结果显示：肝癌小鼠血清IL-4、IL-10及IFN-γ的吸光度增加，IL-2的吸光度减少。治疗后，IL-4、IL-10及IFN-γ的吸光度出现不同程度的下降，IL-2的吸光度有所增加，提示治疗后机体的Th2细胞偏移得到了纠正，但由于IFN-γ和IL-2的吸光度表现不同步，与文献报道的一致上升或一致下降不一致，故Th1细胞的状态还有待进一步的研究。 WesternBlot结果显示：肝癌小鼠脾脏细胞周期通路的关键蛋白CyclinD1和B细胞受体信号通路的关键蛋白NF-κBP65的翻译水平均表现出下调趋势，治疗后表现出的不同程度的上调趋势，与各自的编码基因Ccndl和Rela的转录水平基本一致。 结论： 1.肝癌小鼠脾脏细胞周期通路比较活跃，B细胞受体信号通路则受到抑制；不同证候小鼠关键基因的紊乱程度不同，可能是脾脏层面肝癌同病异证客观存在的物质基础。 2.在方法学上，建立了肝癌小鼠辨证论治量化评价指标体系；筛选出中医个体化辨证论治联合介入/索拉非尼为原发性肝癌的最佳治疗方案，但该方案的优势并不十分明显，具有继续优化和提高的空间。 3.在肝癌小鼠脾脏层面，中医个体化辨证论治联合介入/索拉非尼通过纠正细胞周期通路和B细胞受体信号通路关键基因和蛋白的表达紊乱，发挥治疗作用。