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三色堇(V. tricolor L.)原产欧洲,为堇菜科堇菜属多年生草本,具有耐热、早花、多花等优良性状,为目前园林中广泛栽培应用的大花三色堇的主要杂交亲本之大花三色堇是重要的花坛花卉,市场需求量很大。大花三色堇的Fl代制种耗费大量人力物力,可利用雄性不育系降低生产成本。本试验拟通过转基因研究创造雄性不育系而加快育种进程,而高效、稳定的再生体系是遗传转化体系的前提,本文围绕再生体系的优化进行了相关研究；为创造抗逆性强、观赏价值高的新品种,本文对三色堇的多倍体诱导进行了初步研究。研究结果如下：1.本文针对不同因素(基本培养基、琼脂浓度、蔗糖浓度、激素配比、活性炭)对大花三色堇的增殖和玻璃化的影响进行了相关研究,得到在含8 g/L琼脂、30 g/L蔗糖、0.5 mg/L BA+0.05 mg/L NAA的MS培养基上玻璃化现象得到缓解。通过观察发现,高温和光照不足是影响无菌苗玻璃化的主要原因,所以组培室内应设有降温措施,无菌苗应单层等距离摆放,用透气性好又透光的封口膜。2.在前人的基础上,以大花三色堇22-8无菌苗的节间茎段为外植体,研究不同基本培养基(MS、1/2MS、改良MS、B5)对大花三色堇再生的影响,得出1/2MS基本培养基上再生率最高；考虑TDZ或BA和NAA组合对再生的影响,得出用1/2MS+1.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA的配方时再生率最高,达到66.7%；加活性炭抑制其再生；暗培5d有利于大花三色堇的再生。继代苗退化严重,再生率急剧下降。3.(1)用露白种子浸泡法和茎尖滴定法两种方法进行多倍体诱导实验。得出种子对秋水仙素很敏感,大部分种子在秋水仙素溶液中浸泡后受毒害死亡,只有在很低的浓度0.05%下才有植株成活。采用茎尖滴定处理的一组,随着浓度的升高、时间的延长,成活率降低,而变异率没有相应的规律。相同0.5%浓度下处理2天时变异率最高,为71.4%；相同时间3天时浓度为0.5%的变异率最高,为73.7%。(2)多倍体的鉴定：变异植株生长缓慢,株高、株幅、叶形指数形态指标明显低于对照,茎粗、叶宽、花径指标明显高于对照,且叶色深绿,叶片褶皱,质地粗糙,花朵褶皱；变异植株气孔变大,气孔密度变小,花粉粒变大；对照二倍体染色体数目为2n=26,四倍体为2n=52；最后通过流式细胞仪检测,我们共得到6棵四倍体,2棵嵌合体。