背景:炎症性肠病（Inflammatory Bowel Disease,IBD）是一种原因不明的慢性非特异性肠道炎症性疾病,发病机制尚不十分清楚。研究表明,肠黏膜炎症引起肠黏膜通透性增加参与了IBD的发生与发展。mtDNA是一种重要的促炎性DAMPs,可与TLR9结合参与多种炎症性疾病的发生。研究发现,mtDNA可通过TLR9明显增加内皮细胞通透性,破坏内皮屏障。我们的研究发现IBD患者血浆中mtDNA水平明显增加,但mtDNA是否通过调控TLR9信号通路引起肠道炎症,进一步影响肠上皮细胞的通透性参与IBD的发生尚不明确,因此本研究在建立Caco-2细胞单层模型的基础上,探讨mtDNA是否通过调控TLR9蛋白的表达影响IBD的肠黏膜通透性及其机制。目的:探讨线粒体DNA对Caco-2细胞单层通透性的影响及作用机制。方法利用Transwell培养板制备Caco-2细胞模型,从C57BL/6J小鼠肝脏中提取mtDNA,然后在Transwell培养板顶侧加入不同浓度的mtDNA（0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml）和异硫氰酸荧光素-葡聚糖（Fluorescein isothiocyanate-dextran,FITC-dextran）,检测不同时间跨上皮电阻（Transepithelial Electrical Resistance,TEER）和FITC-dextran跨膜转运量,确定最佳mtDNA浓度;再将实验分为四组,分别加入FITC-dextran、mtDNA+FITC-dextran、TLR9拮抗剂（ODN TTAGGG）+FITC-dextran,mtDNA+ODN TTAGGG+FITC-dextran,检测不同时间TEER和FITC-dextran跨膜转运量。同时分别用mtDNA、ODN TTAGGG、mtDNA+ODN TTAGGG预处理Caco-2细胞,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法检测TLR9mRNA表达水平,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测上清液中TNF-ɑ、IL-6、IL-1β和IL-18的水平。结果与对照组相比,随着mtDNA作用时间的延长和作用浓度的增加,Caco-2细胞单层的TEER降低,FITC-dextran跨膜转运量增加,其中mtDNA浓度为10μg/ml时,TEER明显降低;以10μg/ml的mtDNA为对照,加入ODN TTAGGG可明显减少TEER下降程度,底室中FITC-dextran含量降低,同时TLR9 mRNA表达水平和炎症因子水平降低。结论mtDNA明显增加Caco-2细胞单层的通透性,机制可能与激活TLR9信号通路有关。