危害菊花的病毒种类很多,已报道的有20余种,我国初步鉴定出7种。对于我国来说,相当一部分的菊花病毒病都属于检疫性病害。因此菊花病毒检测方法的研究,对我国菊花产业的发展具有重要意义。匍匐小菊是通过抗逆性强的野生小菊与分枝性强且生长速度快的野生小菊杂交而育成的新种,该种植株低矮,生长速度快,是极好绿化材料。为了能够使用转基因技术对匍匐小菊进行改良,建立其组织培养再生系统是必要的。本研究以四个菊花品种为材料,研究了PT-PCR检测CVB、TAV、CChMVd的技术;以匍匐小菊为材料,建立匍匐小菊的叶盘再生体系。取得以下研究结果:1.利用CVB、TAV、CChMVd的已知基因序列设计引物,对这三种病毒进行了RT-PCR检测,建立了RT-PCR检测技术体系,并克隆了特异扩增产物,测序结果与已报道的基因序列进行核苷酸同源性分析。RT-PCR得到的CVB基因的部分片段,长633bp,该序列与已发表的序列同源性在82%左右。RT-PCR得到的TAV基因的部分片段,长842bp,该序列与已发表的序列同源性在98%左右。CChMVd是一种类病毒,通过RT-PCR得到的片段,长217bp,该序列与已发表的序列同源性在98%以上。2.以CChMVd为材料测试RT-PCR的灵敏度,结果表日月,PCR体系中含有fg级病毒RNA,反转录后,可以检测出来。3.建立了菊花B病毒(CVB)和番茄不孕病毒(TAV)两重RT-PCR检测体系,检测效果与普通RT-PCR相同。4.利用得到的TAV CP的全基因,做原核表达,产生28kD的CP蛋白,可用于制作抗血清。5.建立了匍匐小菊的叶盘再生体系。以MS为基本培养基添加NAA和6-BA这两种激素,建立无菌苗的培养基为MS+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA;生根培养基为1/2MS+0.1 mg/L NAA,一周左右就开始生根,生根率为100%;叶盘再生培养基为MS+0.1 mg/LNAA+0.5 mg/L 6-BA,芽诱导率为96%。