从萨氏海鞘(Cionasavignyi)中我们分离出了一种新型的具有抗肿瘤活性的多肽,即CS5931,其分子量为5931Da。实验表明,CS5931可以抑制多种癌细胞的生长,可以对人类肝癌细胞BEL-7402进行诱导从而使癌细胞死亡。N-末端序列的分析结果表明,CS5931与人类颗粒体蛋白(granulin, GRN)具有同源性。早期利用分子生物学技术,实验室成功克隆了编码多肽CS5931全长cDNA序列,并因此获得了CS593 1的氨基酸序列,此外还通过基因工程技术对该氨基酸序列进行了重组表达。本研究采用亲和层析法,来获得高纯度的重组多肽CS5931,后期将对该重组多肽进行分子机制及其抗肿瘤活性的研究。我们在实验中将编码多肽CS5931的基因片段连接到了表达载体pET21a(+)上从而构建了表达载体pET21a(+)-CS5931,并且通过将载体转入到含有分子伴侣质粒pG-KJE8的Origami(DE3)中构建了表达体系Origami/pET21a(+)-CS5931+ pG-KJE8,我们对该表达体系进行了诱导并得到了含硫氧还蛋白标签的表达产物重组多肽CS5931-His,且表达产物为可溶性蛋白。随后经变性纯化、复性和蛋白酶酶切,我们得到了纯度不小于95%的带有His-tag的重组多肽CS5931-HiS。重组多肽CS5931-His的His标签位于C-末端,在宿主菌种中的表达形式主要是可溶性形式表达。本课题表明,收集菌体裂解液上清液(含有可溶性表达蛋白),在变性的条件下,经镍离子亲和层析柱亲和、用浓度为50 mM的咪唑洗去杂蛋白,并用浓度为500mM的咪唑洗脱,三步即可获得纯化的重组多肽CS5931-His。重组多肽CS5931-His对癌细胞生长的抑制作用通过MTT法进行了评价。结果显示,CS5931-His对人类宫颈肿瘤细胞Hela、人类结肠肿瘤细胞HCT116和RKO、人类白血病细胞HL60以及人类肺癌肿瘤细胞A549均有较不错的增殖抑制作用。本课题对开发海洋多肽类抗肿瘤新药具有非常重要的价值,而且对建立Enolase 1作为抗肿瘤药物的新靶标也具有重要的意义。2014年3月,民进中央在在全国政协十二届二次会议上提交了关于利用非食用作物修复重金属污染土壤的提案,提案中指出,针对现在我国土壤重金属污染越来越严重的问题,可以利用非食用经济作物,如苎麻、棉花等,工业用油料作物如海甘蓝、蓖麻等,以及其它非食用作物,通过吸收并富集作用将重金属移出土壤,从而达到污染治理与生态恢复的目的,这一提案在修复效果和经济效益方面都具有优势明显,并且同时兼有经济效益和环境效益,易于被接受和推广。棉花是世界上最主要的农作物之一,其产量大而且生产成本低,我国的棉花种植面积基本在500万公顷左右(约合7500万亩),棉花的产量在700万吨左右。长江流域、黄河流域和西北内陆棉区是我国三大棉区,具体包括冀、鲁、豫、陕、晋、津、苏、皖、湘、鄂、赣、新、甘等13个省区。因此,我们选用棉花处理土壤重金属污染具有极大的便利性和可行性。本实验将来自香港大学的ACBP1基因转化至农杆菌LBA4404中,然后利用农杆菌介导法将该基因转入棉花。使棉花的抗重金属能力大大增强,从而起到治理重金属污染的土壤。实验主要探究了农杆菌介导方法以及棉花再生体系的建立。实验选取“石抗434”“大德”“石杂101”三种棉花,最终选定以“石抗”的下胚轴作为基因转化的受体,对愈伤组织培养条件优化,筛选出胚性愈伤组织出愈率高的条件,针对各时期愈伤组织培养的特定需要,考察了碳源、琼脂、不同的激素配比、抗褐化剂等因素,进而优化了适合“石抗434”的遗传转化再生体系。