论文部分内容阅读
目的:从CD39、CD73和A2a组成的腺苷代谢通路研究针灸对溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)模型小鼠体内Treg细胞的调节作用,以期深入探讨针灸通过调节腺苷代谢和维持Treg细胞稳态进而发挥治疗UC的作用机制。方法:SPF级雄性C57BL/6J小鼠32只,用葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium,DSS)饮用法复制UC模型,随机分为空白组、模型组、艾灸组和电针组。电针组和艾灸组在“关元”、“足三里”穴连续治疗5天比较各组小鼠一般状况、大便隐血情况,测定各组小鼠疾病活动指数(Disease activity index,DAI)。比较各组结肠长度及病理结构变化,运用免疫荧光法(Immunofluorescence,IF)和蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测结肠三磷酸水解酶CD39,5,-核苷酸外切酶CD73,腺苷A2a受体的表达情况;流式细胞术(Flowcytometry,FCM)检测外周血、脾脏和局部引流淋巴结CD4~+CD39~+T细胞、CD4~+CD39~+Foxp3~+T细胞、CD4~+CD73~+T细胞和CD4~+CD73~+Foxp3~+T细胞的含量。结果:1.针灸对UC模型小鼠的干预效应1.1小鼠饮用2%DSS后,一般状态逐渐变差,出现血便或脓血便,造模第5天与空白组相比DAI评分增高(P<0.05);经电针或艾灸治疗后,电针组和艾灸组小鼠一般状况明显好转,便血情况明显改善,相比模型组,两组DAI均下降(P均<0.05),接近空白组水平(P>0.05)。1.2与空白组对比,模型组小鼠结肠明显缩短,光镜下显示,模型组小鼠结肠出现炎性细胞浸润、粘膜溃疡或出血等典型的炎症表现;电针组和艾灸组结肠长度基本恢复,组织病理学情况明显改善。2.针灸对UC小鼠腺苷代谢通路的调节作用2.1 CD39、CD73、A2a在结肠的表达结果:与空白组相比,模型组小鼠结肠CD39、CD73、A2a荧光强度、阳性细胞数量及蛋白表达均降低(A2a蛋白P<0.05,余P<0.01);治疗后,艾灸组和电针组小鼠结肠CD39、CD73、A2a荧光强度、阳性细胞数量及蛋白表达增高。与电针组相比,艾灸组小鼠结肠CD73、A2a荧光强度、阳性细胞数量以及CD39、CD73蛋白表达均高于电针组(P<0.01)。2.2 CD39、CD73在外周血、腹股沟局部引流淋巴结和脾脏Treg细胞表达情况:2.2.1与空白组比较,模型组小鼠外周血、淋巴结和脾脏CD4~+CD39~+T细胞、CD4~+Foxp3~+CD39~+T细胞、CD4~+CD73~+T细胞、CD4~+Foxp3~+CD73~+T细胞数量均下降(P均<0.01)。模型组外周血、淋巴结和脾脏中CD4~+Foxp3~+CD39~+T细胞与CD4~+CD39~+T细胞的比率和CD4~+Foxp3~+CD73~+T细胞与CD4~+CD73~+T细胞的比率均降低(P<0.01)。2.2.2电针和艾灸干预后,与模型组比较,艾灸组与电针组小鼠外周血、淋巴结和脾脏中CD4~+CD39~+T、CD4~+Foxp3~+CD39~+T、CD4~+CD73~+T、CD4~+Foxp3~+CD73~+T细胞数量均升高(P值均小于0.01)。艾灸组和电针组外周血、淋巴结、脾脏CD4~+Foxp3~+CD39~+T细胞与CD4~+CD39~+T细胞的比率,CD4~+Foxp3~+CD73~+T细胞与CD4~+CD73~+T细胞的比率升高(除艾灸组淋巴结中CD39~+T细胞比率P>0.05,余P<0.01)。2.2.3与电针组比较,艾灸组脾脏中CD4~+Foxp3~+CD73~+T细胞数量升高(P<0.01),艾灸组外周血中CD4~+Foxp3~+CD39~+T细胞、淋巴结中CD4~+CD73~+T细胞、脾脏中CD4~+CD39~+T和CD4~+CD73~+T细胞降低(P<0.01),艾灸组在外周血、淋巴结中CD4~+Foxp3~+CD39~+T细胞与CD4~+CD39~+T细胞的比率均降低(P<0.01,P<0.05),艾灸组脾脏中CD4~+Foxp3~+CD73~+T细胞与CD4~+CD73~+T细胞比率升高(P<0.01)。结论:1、艾灸和电针均对DSS诱导的UC小鼠有良好的干预效应。2、艾灸和电针能提高UC小鼠CD39,CD73,A2a蛋白在结肠组织中的表达,并且能增加外周血、腹股沟引流淋巴结和脾脏中CD39、CD73阳性的Treg细胞的比率。3、艾灸和电针对UC小鼠的治疗效应可能与干预CD39/CD73/A2a腺苷代谢通路并影响Treg细胞抗炎免疫效应有关。4、艾灸和电针对UC小鼠CD39/CD73/A2a腺苷代谢通路作用强弱待进一步研究。