【摘 要】
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目的:研究新生大鼠支气管肺发育不良(BPD)发生、发展中核转运蛋白KPNA2定位及表达的动态变化,探究其在早产儿BPD发病机制中的作用。实验方法:将100只新生大鼠于生后12h内随机分为BPD组(n=50)和对照组(n=50),采用课题组以往的方法制备模型,BPD组吸入氧浓度(Fi O2)为80%~85%,对照组吸入空气,两组分别于1、3、7、10、14d采集肺组织标本,分离、纯化及培养肺泡Ⅱ型上
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目的:研究新生大鼠支气管肺发育不良(BPD)发生、发展中核转运蛋白KPNA2定位及表达的动态变化,探究其在早产儿BPD发病机制中的作用。实验方法:将100只新生大鼠于生后12h内随机分为BPD组(n=50)和对照组(n=50),采用课题组以往的方法制备模型,BPD组吸入氧浓度(Fi O2)为80%~85%,对照组吸入空气,两组分别于1、3、7、10、14d采集肺组织标本,分离、纯化及培养肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)。免疫组化技术观察肺组织KPNA2的定位及表达,免疫荧光技术观察AECⅡ内KPNA2的定位及表达,核浆分离技术及Western blot检测肺组织细胞核、细胞浆内KPNA2蛋白表达,荧光实时定量PCR检测肺组织KPNA2 mRNA表达。实验结果:免疫组化可见KPNA2主要定位于肺泡上皮细胞及支气管上皮细胞,胞浆胞核均有表达,BPD组较对照组表达增强。进一步细胞免疫荧光显示KPNA2胞浆胞核均有表达,对照组各时间点主要定位于细胞核,BPD组1d主要定位于细胞核,与对照组相较,表达无明显差异,3d14d主要定位于细胞浆内,与对照组相较,KPNA2核表达明显减弱,细胞浆表达明显增强。KPNA2总蛋白及浆蛋白表达趋势基本一致,与对照组相较,BPD组1d开始增高(P<0.05),3d达高峰(P<0.05),7d开始逐渐下降(P<0.05),14d仍高于对照组(P<0.05);与对照组相比,BPD组KPNA2核蛋白表达1d无明显差异(P>0.05),3d开始明显降低(P<0.01),持续降低至14d(P<0.05)。与对照组相比,KPNA2 mRNA表达,BPD组1d开始增高(P<0.05),3d达高峰(P<0.05),7d开始逐渐下降(P<0.01),至14d仍高于对照组(P<0.05)。结论:暴露于高氧中新生鼠,KPNA2蛋白及基因表达水平虽上调,但其分布异常,大量潴留于胞浆,提示KPNA2核转运功能障碍可能是影响BPD肺上皮细胞DNA损伤修复应答早期启动的重要机制。
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