【摘 要】
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目的:双磷酸盐相关性骨坏死在细胞和分子水平上的理解尚不充分。本文从成骨角度探讨双磷酸盐引起骨坏死的分子机制。方法:复苏第2代人骨髓间充质干细胞(BMMSCs);扩大培养至第
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目的:双磷酸盐相关性骨坏死在细胞和分子水平上的理解尚不充分。本文从成骨角度探讨双磷酸盐引起骨坏死的分子机制。方法:复苏第2代人骨髓间充质干细胞(BMMSCs);扩大培养至第5代人骨髓间充质干细胞(BMMSCs)进行后续实验;流式细胞仪检测细胞表面特定标记鉴定BMMSCs干性;用细胞增殖实验来测定帕米磷酸二钠(PD)的实验浓度;用碱性磷酸酶(ALP)活性,ALP染色,茜素红(ARS)染色检测不同浓度的PD(0、0.1、0.5、1、5、10μg/mL)处理后BMMSCs成骨分化水平;0.5μg/mLPD处理后的细胞用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(western blotting)测定Wnt/β-catenin信号通路的相关基因及蛋白质表达。使用Wnt3a观察0.5μg/mLPD处理后BMMSCs成骨分化。结果:流式细胞仪检测结果显示STRO-1:57.26%、CD146:88.49%、CD105:93.17%、CD90:95.73%、CD34:2.56%、CD14:1.03%;1、5 和 10μg/mLPD抑制BMMSCs增长(P<0.05),0.1和0.5μg/mL PD不影响BMMSCs增长(p≥0.05);BMMSCs用0.5μg/mL PD处理后,其ALP活性、ALP活性及ARS染色均降低(p<0.05);PD(0.5μg/mL)减少Wnt/β-ctenin信号相关基因及蛋蛋的表达。于PD(0.5μg/mL)中加入Wnt3a后BMMSCs的ALP活力、ALP染色和ARS染色恢复(P<0.05)。结论:PD通过影响Wnt/β-catenin信号通路抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化能力,Wnt3a可以减少PD在BMMSCs造成的负面影响从而可能降低双磷酸盐相关性颌骨骨坏死的发生。
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