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猪轮状病毒(Porcine Rotavirus,PRV)属于呼肠病毒科轮状病毒属，是引起仔猪病毒性腹泻的主要病原之一，该病在世界范围内分布，给世界各地的畜牧业造成严重的损失。本研究根据GenBank中已发表的猪轮状病毒VP4全基因序列，设计合成一对引物，以PRV/JL94株RNA为模板，通过RT-PCR技术扩增出约2.3kb的基因片段，命名为VP4。将其与pMD18-T载体连接，构建重组质粒VP4-pMD18-T，对扩增的VP4全基因进行序列测定。测序结果表明JL94-VP4基因全长2362bp，含有一个完整的开放阅读框架，编码776个氨基酸。将测序结果与国外分离株BEN-307株、Gottfried株VP4全基因序列比较，氨基酸同源性分别为96.06%和71.88%。说明JL94株同BEN-307株属于同一VP4血清型，而同Gottfried株属于不同血清型。研究资料表明PRV VP4基因5’端长750bp的特异性片段主要决定其活性，据此又设计合成一对引物，克隆VP4基因5’端1bp-756bp(包括全部的VP8区、胰酶区和VP5的N端)，命名为VP4主要抗原位点基因；该主要抗原位点基因与PRV国外分离株CRW-8株、Gottfried株该基因片段比较，氨基酸同源性分别为96.43%和67%。同型之间高度保守，不同型间差别较大，其中aa81-aa207变异最大。将PRV/JL94-VP4主要抗原位点基因同载体pGEX-6P-1连接后转化入E.Coli.BL21 (DE3)plysS，经IPTG诱导表达出50kDa的融合蛋白，与预计相符，对表达产物进行光密度扫描定量分析，融合蛋白占菌体总蛋白的26.6%。对表达的蛋白进行Western blot分析和谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化，得到纯化的VP4融合蛋白。Western blot证实所表达的融合蛋白有较好的反应原性。本研究在国内首次克隆了PRV/JL94株VP4全基因，并获得了VP4主要抗原位点基因的表达，为研究我国轮状病毒的病毒毒力的相关基因位点、抗原变异、VP4蛋白的致病机理研究及基因工程疫苗的研制提供依据。