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本研究对实验室保存和购买的9株黑曲霉菌株进行了产植酸酶酶活测定，并对产酶培养基和培养时间等条件进行优化，结果表明在麦麸半合成培养基中30℃发酵培养96h，产植酸酶活性最高，筛选出一株产植酸酶较高的3928菌株，酶活可达693μg/(g·min)；该菌株产生的粗酶液经60℃高温处理后，酶活保存率大于85％，适用于作饲料添加剂。该菌株经紫外线诱变处理，可得到一株产植酸酶较高的2号菌株，酶活达到2050μg/(g·min)。
为了获得高产菌株的phyA基因，以便比较其序列与网上报道标准菌株序列的同源性，为后期的表达提供材料，我们采用文献报道的中性裂解法提Aspergillusniger3928的基因组DNA，并根据Genbank中报道的黑曲霉基因序列，应用DNASIS和DNASTAR设计、筛选出一对引物，并分别加入了EcoRⅠ和NotⅠ的内切酶位点。经PCR扩增后，得到一条长度约为1500bp的DNA片段，与试验设计相符。同时对PCR反应条件进行优化，确定最佳反应条件。
对PCR产物采用胶回收试剂盒进行回收，根据已报道的黑曲霉植酸酶phyA基因的酶切图谱，对目的片段进行酶切，该基因能被SacⅠ、PstⅠ和SalⅠ三种内切酶酶切，酶切片段大小与报道的相一致，鉴定了PCR扩增片段的正确性。该基因产物定向克隆到PMD-18T载体的多克隆位点上，构建了含有目的片段的重组质粒，并转化大肠杆菌JM109，获得两株阳性克隆菌株，分别称之为1＃和2＃。阳性菌株的序列测定表明，扩增片段中含有完整的真菌植酸酶phyA基因，扩增片段的长度为1506bp，其中在+45bp～+146bp的102个核苷酸序列是一典型的真菌内含子序列，基因内含有真菌内含子的特征保守序列，并且转录起始密码子均为ATG。该基因编码467个氨基酸，分子量大约是51.37kDa，包含有13个潜在的糖基化位点，N-端的19个氨基酸为信号肽序列，其余的448个氨基酸为成熟植酸酶的氨基酸序列。从氨基酸序列上还找到了植酸酶的活性位点序列：CRVTFAPVLSRHGARYPTDSKGK，它位于氨基酸序列的+71bp～+93bp。其中RHGARYPT是微生物来源的植酸酶活性位点中最保守的序列。
序列比较结果显示：本研究克隆的phyA基因与AY513749和AF218813的phyA基因的同源性分别是98.87％和92.62％，编码的氨基酸序列同源性分别为97.43％和92.93％。