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目的:研究外周血单个核细胞(PBMC)分泌结核抗体试验和酶联免疫斑点试验(ELISPOT)对活动性结核病(TB)的临床诊断价值。方法:受试者共163例,包括活动性结核病患者104例(菌阳肺结核27例,菌阴肺结核61例,肺外结核16例)、结核分枝杆菌(MTB)潜伏感染者(LTBI)26例和健康对照(HC)33名。采用Ficoll密度梯度离心法分离受试者PBMCs,体外培养4d后收集培养上清液,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和蛋白免疫印迹法(WB)检测PBMCs培养上清液中抗原特异性结核抗体;用ELISPOT方法检测受试者早期分泌抗原靶6KDa蛋白(ESAT-6)、ESAT-6/培养滤出液蛋白-10(CFP-10)融合抗原刺激后产生γ-干扰素的T细胞水平;比较分析三种方法的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。结果:1. ELISA法检测TB组特异性结核抗体的OD值高于LTBI组和HC组(p<0.001);特异性结核抗体区分TB和LTBI、HC的曲线下面积(AUC)分别为0.857、0.944,当cut-off值为0.42时,区分TB和LTBI的敏感度为77.9%,特异度为80.8%,阳性预测值为94.2%,阴性预测值为47.7%;区分TB和HC的敏感度为77.9%,特异度为93.9%,阳性预测值为97.6%,阴性预测值为57.4%。2. WB法检测活动性结核的敏感度为79.2%,特异度为100.0%,阳性预测值为100.0%,阴性预测值为40.7%(p<0.001)。3. ELISPOT法检测活动性结核的敏感度为82.7%,特异度为87.9%,阳性预测值为95.6%,阴性预测值为61.7%(p<0.001)。4. ELISA、WB和ELISPOT方法诊断活动性结核的敏感度、特异度、阳性预测值进行平行比较,差异均无统计学意义(p>0.05);阴性预测值进行平行比较,WB法的阴性预测值低于ELISA法和ELISPOT法(p<0.05);ELISA和ELISPOT法在菌阳组、菌阴组活动性肺结核的阳性检出率比较,差异均无统计学意义(p>0.05)。5. ELISA、WB、ELISOPT法检测16例肺外结核的阳性率分别为81.3%、56.3%、68.8%。结论:1. PBMC结核抗体分泌试验的ELISA法,对活动性结核的诊断效能高,并可以区分活动性结核、结核分枝杆菌潜伏感染及健康人。2. PBMC结核抗体分泌试验的免疫印迹法操作简便,诊断活动性结核的特异度高。3.PBMC结核抗体分泌试验与ELISPOT法对活动性结核均具有较高的诊断价值,PBMC结核抗体分泌试验可以作为结核病实验室诊断的新方法。