目的:Oct4是第一个被发现只在多能细胞中表达的转录因子,其功能被认为是控制细胞多能性的决定性因素。Oct4的这种作用机制目前并未明确,本研究将克隆小鼠Oct4基因,构建其真核表达载体pEGFP-N2-Oct4,为今后能进一步研究小鼠Oct4基因的生物学功能奠定实验基础。方法:用TRIzol Reagent提取小鼠胚胎干细胞总RNA,并经反转录-聚合酶链反应获得小鼠Oct4 DNA,将该基因连接克隆到含有增强型绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N2上,以构建重组质粒pEGFP-N2- OCT4。结果:获取小鼠胚胎干细胞OCT4基因的全序列cDNA。将能发出绿色荧光的增强型绿色荧光蛋白报告基因融合OCT4基因构建OCT4 cDNA真核表达质粒,酶切后经DNA电泳鉴定及DNA测序证实准确无误。结论:成功构建了重组质粒pEGFP- N2- OCT4,将增强型绿色荧光蛋白报告基因融合在OCT4基因的3’端,既保留了OCT4的生物学活性,又便于在研究OCT4生物学功能实验中可检测到蛋白表达。