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目的:RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种新型有效的基因沉默技术,广泛地应用在肿瘤基因的研究中。许多研究表明,血管内皮生长因子受体3(vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR-3)与肿瘤的转移有关,但是否与肿瘤的生长增殖直接相关仍不清楚,本研究的目的在于通过构建VEGFR-3 siRNA的表达载体来了解抑制VEGFR-3的表达是否可以抑制结肠癌细胞的生长。方法:根据RNA干扰设计的原则,设计3对包含有64bp的干扰片段,此片段有一发夹结构,两端有和质粒相接的粘性末端,和pSUPER载体相连接后双酶切鉴定,并进行测序,构建成pSUPER-siRNA/VEGFR-3重组载体,将重组载体转染入结肠癌LoVo细胞系,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)观察细胞的生长曲线,RT-实时荧光定量PCR检测重组载体在转染前后VEGFR-3 mRNA表达水平的变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测VEGFR-3的蛋白表达。通过筛选,将转染高效表达VEGFR-3 siRNA的载体和空pSUPER载体的LoVo细胞注射入裸鼠皮下形成结肠癌肿瘤模型,定期测定肿瘤生长速度,肿瘤标本免疫组织化学了解肿瘤VEGFR-3的表达。结果:经酶切鉴定,靶向VEGFR-3的小干扰RNA表达载体构建成功,重组载体出现281bp的小片段,而空载体出现的则为241bp。将构建的3条pSUPER-siRNA转染结肠癌LoVo细胞系后,pSUPER-siRNA2/VEGFR-3重组载体可显著抑制LoVo细胞中VEGFR-3基因的表达,转染pSUPER-siRNA2/VEGFR-3细胞生长明显抑制,Western blot检测显示VEGFR-3基因蛋白表达明显降低,与阴性对照组相比差异具有显著性(P＜0.05)。将转染阳性质粒后的肿瘤细胞和空载体细胞建造的裸鼠结肠癌肿瘤模型,见前者肿瘤增长较后者明显较慢,肿瘤体积在4周后测定对照组比对照组明显小((201.4±34.6)mm3 vs(439.6±31.9)mm~3))。肿瘤组织VEGFR-3免疫组化染色后发现前者的淋巴管形成较后者减少((4.8±3.9)mm3 vs(13.6±5.6)mm~3)差异有统计学意义(P＜0.05)。结论:重组VEGFR-3 siRNA表达载体成功构建,体外实验表明其对结肠癌LoVo细胞系血管内皮生长受体3形成基因沉默,并抑制胃癌细胞的增殖。体内实验表明,重组VEGFR-3 siRNA表达载体对结肠癌的VEGFR-3的表达有下调作用,可以抑制结肠癌的生长。结果表明靶向VEGFR-3的下干扰RNA是抑制VEGFR-3的一个有效工具,可以减少血管淋巴管的生成。