PTEN基因转染对膀胱癌T24细胞凋亡的影响

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目的通过研究抑癌基因PTEN在膀胱肿瘤细胞中的表达,研究PTEN在膀胱癌中的表达情况与凋亡的关系。观察PTEN基因对膀胱癌T24细胞的抑制作用,并初步探讨其对肿瘤抑制作用的机制。方法将重组质粒转染入膀胱癌T24细胞中,实验分:A组(实验组含pEGFP-PTEN质粒)、B组(空载体转染组含pEGFP-N1空质粒)和C组(空白对照组只有等量脂质体);观察PTEN基因在体外对膀胱癌T24细胞的抑制作用。目的基因的表达采用RT-PCR法检测;Western blotting法检测目的PTEN蛋白和Phospho-Akt蛋白表达;细胞的生长抑制作用通过细胞集落形成实验进行测定;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测PTEN基因对T24凋亡的影响;结果荧光显微镜下观察到PTEN基因在T24细胞系中成功表达;扩增培养后RT-PCR结果显示,1200bp处三组细胞均有条带出现,与B组或C组相比,A组相对OD值明显增强(P<0.05)。Western blotting法检测实验组PTEN蛋白表达水平明显高于B组或C对照组(P<0.05),Phospho-Akt蛋白(实验组)表达低于B组或C组(P<0.05);T24细胞的集落数量及大小均有不同程度的降低,A组降低最为明显(P<0.05);实验组凋亡率明显高于B组或C组(P<0.05)。结论将目的基因通过脂质体介导法转染入T24细胞,并在T24细胞中稳定表达,这种稳定表达在体外环境下可以抑制肿瘤细胞的增殖。通过Westernblot检测显示在控制凋亡方面可能是野生型PTEN基因下调了PhospholatedAkt的表达水平,通过观察这种凋亡的机制,提示PTEN基因对膀胱癌T24细胞株的抑制作用的机制之一是PTEN能够阻断PI3K/AKT途径。它为膀胱癌的基因治疗提供了一定的实验依据,也为基因治疗的临床应用奠定基础。
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