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试验于2003年7月~2004年10月在湖南农业大学果树实验基地、园艺园林学院生化分析室、生命科学楼细胞工程实验室及进行;试验的材料为刺葡萄(2n=2x=38),选择旺盛生长的刺葡萄一年生枝条,去除上部部分枝梢,对下部枝条的腋芽进行诱变处理,不处理腋芽全部抹除。为了给处理芽相同的生长势,把枝条拉平,使各位置处理芽生长条件一致。 诱变方法有:秋水仙素浸润腋芽法、IAA浸润腋芽法:选择下午5-6点,用白色脱脂棉包在腋芽上,粘胶布密封,用注射针管、注药液到脱脂棉内,使药液充分浸润腋芽,每天注射一次,连续处理4天,第5天解除脱脂棉,用清水冲去药液。每种浓度处理2-3个枝条,30个腋芽。注意在处理的4天内要遮光,可用黑塑料布包扎,保持温度20度左右,不能有雨淋,保证药液浓度不变。秋水仙素注射腋芽法:下午5、6点用细针管直接注射药液到腋芽生长点内,每天一次,连续4天,注射后用黑胶布包芽,每种浓度处理2-3个枝条,30个腋芽。第5天冲洗腋芽残留药液,留未处理枝为对照枝。由于药害作用,对萌发迟缓的芽用赤霉素处理,促进腋芽萌发生长。用清水处理做对照。用0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%浓度的秋水仙素溶液和0.01%、0.03%、0.05%、0.07%、0.1%的IAA诱变处理腋芽,生长60-70天后,进行形态观察和去壁低渗法染色体观察,首次获得四倍体刺葡萄材料(包括嵌合体)。以二倍体为对照,研究了变异株在形态学、细胞学等方面的变化。主要结果如下: 1.不同浓度的秋水仙素和IAA各处理中,以0.3%秋水仙素的浓度处理获得最佳效果,诱变率为33.3%,以0.07%的IAA处理效果好,变异率为16.7%。 2.变异植株形态均表现为叶片增厚21.4%~26.6%,叶色变深,叶缘锯齿增大,节间变短为对照的73.7%。 3.显微解剖学研究表明,变异枝条叶片气孔密度减小,保卫细胞增大,长增加9.0μm,宽增加2.5μm。花粉粒增大31.0%,四孔沟花粉、畸形花粉显著增多,整齐度降低。 4.细胞学研究表明,变异株染色体出现2n=4X=76,也观察到非成倍体细胞,秋水仙素处理还有八倍体的细胞出现。 5.通过本试验进一步验证了秋水仙素对染色体的加倍作用,说明葡萄容易染色体加倍,总结了秋水仙素诱变育种的方法和染色体观察的简便方法,有一定的推广价值。关键词:刺葡萄;诱变;多倍体