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目的：用人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白(HPV L1)C-末端保守序列多肽制备抗HPV L1单克隆抗体,并对所制备的抗体进行免疫反应特性及检测能力的鉴定。 方法：(1)用HPV L1 C-末端一段30个氨基酸长度的保守序列,其C-末端连接一个半胱氨酸(EC31)后与载体蛋白KLH偶联,并用偶联物免疫小鼠,制备抗HPV L1单克隆抗体。(2)合成以该保守序列为基础的15个氨基酸残基长、N-端起相互错开5个氨基酸残基的4个小肽(EF15、EK15、DA15、PK15),用酶联免疫吸附实验检测抗体的免疫反应特性。(3)分别采用酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫印迹实验(Western blot)、细胞免疫组织化学等方法检测抗体与多种型别HPV L1的反应性,以确定抗体的检测能力。 结果：(1)经免疫、融合、筛选、克隆及纯化后得到了三种单克隆抗体,即细胞上清4G12,3A9以及纯化单克隆抗体5A4。(2)三种抗体效价均较为理想,细胞上清4G12和3A9的效价在1：1000以上,纯化单克隆抗体5A4的效价在1：320000以上；用4个小肽分别对抗体进行封闭,发现EF对4G12有封闭作用,PK对3A9有封闭作用,DA对5A4有封闭作用,封闭效能分别为99.38%、52.05%和53.61%。(3)用ELISA方法检测抗体对HPV阳性细胞总蛋白及L1重组蛋白的反应性,均有阳性反应。(4)用Western blot方法检测抗体对HPV阳性细胞总蛋白及L1重组蛋白的反应性,L1重组蛋白出现明显条带,而细胞总蛋白未见明显条带。(5)用细胞免疫组织化学方法检测HPV阳性细胞,呈阳性反应。 结论：(1)本实验所制备的三种抗HPV L1单克隆抗体效价较为理想,且三种抗体具有不同的优势表位。(2)本实验所制备的抗体可用酶联免疫吸附实验、免疫印迹实验及细胞免疫组织化学方法检测出多型别的HPV L1,但采用免疫印迹实验方法未能检测出用人宫颈癌细胞提取的细胞总蛋白。