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目的制备人参皂苷Rd微乳和微乳凝胶,评价其制剂学性质;建立生物样品中人参皂苷Rd的LC-MS/MS测定方法;研究大鼠鼻腔给予人参皂苷Rd微乳和微乳凝胶后,血液和脑组织中人参皂苷Rd的药代动力学,评价人参皂苷Rd在血液及脑部的分布情况,为其更好地运用于脑神经保护、治疗急性缺血性脑卒中进行有意义的探索,并提供新的给药途径。方法1 采用HPLC含量测定方法,测定人参皂苷Rd的酸碱稳定性和油水分配系数。测定人参皂苷Rd在不同油相、表面活性剂和助表面活性剂中的平衡溶解度。2 采用伪三元相图法优化了表面活性剂和助表面活性剂在处方中的比例。根据粒径、多分散系数（PDI）和载药量大小,筛选处方,得到最优配比,制备了人参皂苷Rd微乳,进一步对载药微乳进行制剂学评价,包括粒径、多分散系数、透射电镜、透光率、电导率、折光率、pH、类型、黏度、稳定性、体外释药和鼻黏膜刺激性研究。3 在微乳处方优化的基础上,筛选了不同的凝胶基质,制备了人参皂苷Rd微乳凝胶,对载药微乳凝胶进行了制剂学评价,包括粒径、多分散系数、透射电镜、电导率、折光率、pH、黏度、稳定性、体外释药和鼻黏膜刺激性研究。4评价微乳和微乳凝胶鼻腔给药后人参皂苷Rd在血液及脑部分布,LC-MS/MS法测定人参皂苷Rd在大鼠血浆和脑组织中的含量。选用SD大鼠作为试验动物,给药前12小时禁食不禁水。分别鼻腔给予人参皂苷Rd溶液、微乳和微乳凝胶,尾静脉给予人参皂苷溶液,并于给药后 8 min、20 min、1h、2 h、6 h、8 h、10 h、24 h、48 h、96 h取血和脑组织（每个时间点6只动物）,测定各时间点的浓度。采用Excel软件绘制药时曲线、Kinetica分析软件计算药代动力学参数,计算生物利用度、药物靶向效率和脑中药物直接转运百分率。结果1 人参皂苷Rd在pH为3.00、5.85、6.80、7.13和9.80的磷酸盐缓冲液中放置24 h的RSD均小于3%,说明其含量基本不变,药物稳定性良好。但在pH 1.00的磷酸盐缓冲液中,放置24 h后RSD大于3%。人参皂苷Rd在不同pH值缓冲液中的油水分配系数在1.08～1.34之间。2人参皂苷Rd微乳的最佳配比为油酸-油酸乙酯-Tween 80-Transcutol P-水=1:4:27.5:27.5:40,载药量100 mg/mL。采用优选的处方所制备的人参皂苷Rd微乳的粒径14.70±0.29 nm,PDI 为 0.192±0.010,分散较好;Zeta 电位为-0.367 ± 0.821 mV,带负电荷;TEM下呈类圆球形,电导率18.63±0.06 μs/cm,折光率1.4199±0.0003,pH 5.06±0.01,黏度34.67±0.21 mpa·s,透光率99.02± 0.11%,为水包油型微乳。微乳经离心后,未产生相分离。微乳放置1、3个月的粒径和PDI变化不大,含量没有显著差异,具有一定的缓释特征,对鼻黏膜无明显刺激性。3人参皂苷Rd微乳凝胶剂最优处方为油酸-油酸乙酯-Tween 80-Transcutol P-水-卡波姆 940=1:4:27.5:27.5:40:0.5,载药量 100 mg/mL。粒径 13.11±0.27nm,PDI 为0.123±0.068,分散较好,Zeta电位为-0.233±0.754 mV,带负电荷,TEM下呈类圆球形,电导率 18.30±0.02 μs/cm,折光率 1.4226±0.0001,pH 4.92±0.01,黏度 59.93 ±0.35 mpa·s。微乳经离心后,未产生相分离。微乳放置1个月的粒径和PDI变化不大,含量没有显著差异,具有显著的缓释特征,对鼻黏膜无明显刺激性。4建立了用于大鼠血浆中人参皂苷Rd的含量测定方法,LC-MS/MS线性范围为1～1000ng/mL,相关系数大于0.99,定量下限为1 ng/mL,低、中、高质控样品日内精密度的RSD值分别为4.39%、2.98%和3.08%,日间精密度的RSD值分别为6.08%、6.97%和8.46%,准确度87.77%～112.67%,提取回收率93.82%～101.50%,基质效应99.65%～103.12%,均符合要求。血浆样品经反复冻融3次、长期冻存和室温放置24h,均保持稳定。线性范围1000-10000 ng/mL,标准曲线回归方程的相关系数大于0.99,低、中、高质控样品日内精密度的RSD值分别为2.19%、1.15%和1.94%,日间精密度的RSD值分别为 2.56%、2.67%和 2.66%,准确度 100.02%～113.13%,提取回收率 88.03%～89.58%。5建立了用于大鼠脑组织中人参皂苷Rd的含量测定方法,LC-MS/MS线性范围为1～1000ng/mL,标准曲线回归方程的相关系数大于0.99,定量下限为1 ng/mL,低、中、高质控样品日内精密度的RSD值分别为5.08%、3.63%和4.16%,日间精密度的RSD值分别为 9.65%、4.26%和 3.48%,准确度 88.35%～107.80%,提取回收率 68.30%～75.69%,基质效应91.25%～102.25%,均符合要求。脑组织样品经反复冻融3次、长期冻存和室温放置24 h,均保持稳定。6人参皂苷Rd微乳、微乳凝胶和溶液通过鼻腔给药和人参皂苷Rd溶液尾静脉注射给药后大鼠血浆的Tmax分别为2.00 h、2.00 h、2.00 h、0.13 h,Cmax分别为26833 ng/mL、46940 ng/mL、4740ng/mL、173033 ng/mL,AUC0-96h分别为333122ngh/mL、493531 ng h/mL、73736ngh/mL、889342ngh/mL,AUC0-∞分别为 343758ngh/mL、506015ngh/mL、74917 ngh/mL、900394 ngh/mL,T1/2 分别为 15.79 h、20.95 h、16.05 h、15.93 h,MRT分别是 19.25 h、20.40h、19.54h、11.11h。7人参皂苷Rd微乳、微乳凝胶和溶液通过鼻腔给药和人参皂苷Rd溶液尾静脉注射给药后,大鼠脑组织的Tmax分别为2.00h、2.00h、2.00h、0.13h,Cmax分别为451.73 ng/mL、1008.25 ng/mL、69.75 ng/mL、988.25 ng/mL,AUC0-96h 分别为 3477.86 ngh/mL、6934.21 ng h/mL、626.19 ng h/mL、7088.34 ng h/mL,AUC0-∞分别为 3983.36 ng h/mL、8912.10 ngh/mL、868.56 ngh/mL、8073.38 ngh/mL,T1/2分别为7.05 h、12.09 h、13.85 h、8.28 h,MRT 分别是 10.48 h、14.96 h、18.70 h、11.07 h。8大鼠鼻腔给予相同剂量人参皂苷Rd微乳、微乳凝胶和溶液,绝对生物利用度分别为37.46%、55.49%和8.29%。人参皂苷Rd微乳和微乳凝胶的相对生物利用度为451.78%和669.32%。AUC的比例按大小顺序依次为人参皂苷Rd微乳凝胶>人参皂苷Rd微乳>人参皂苷Rd溶液。人参皂苷Rd微乳及微乳凝胶的药物靶向效率为130.99%、176.28%,脑中药物直接转运百分率为23.66%、43.27%。结论1处方前研究结果显示,人参皂苷Rd在碱性条件下较稳定,在强酸性条件下易被破坏,故在其原料药和相关制剂的生产、运输和贮存过程中,应选用固体形式,如为液体形式,则尽可能避免低pH环境。根据人参皂苷Rd在不同pH缓冲液中正辛醇-水体系中的油水分配系,可以推测人参皂苷Rd生物利用度低并不是由渗透性影响的,而可能是溶解度低,溶出速率慢所导致。2优选出人参皂苷Rd微乳及微乳凝胶的最佳处方且符合制剂学要求。3建立的用于大鼠血浆中人参皂苷Rd的LC-MS/MS方法,人参皂苷Rd的出峰时间约为8min,检测范围1～1000ng/mL,1000～10000ng/mL,方法的专属性良好,低、中、高质控样品提取回收率一致,准确度和精密度均符合要求。4建立的用于大鼠脑组织中人参皂苷Rd的LC-MS/MS方法,人参皂苷Rd的出峰时间也约为8min,范围为1～1000ng/mL,方法的专属性良好,低、中、高质控样品提取回收率一致,准确度和精密度均符合要求。5鼻腔给药后,人参皂苷微乳及微乳凝胶在大鼠体内的药物生物利用度均有不同程度地提高。人参皂苷Rd微乳凝胶经鼻腔给药后的药物靶向效率和脑中药物直接转运百分率最大,显示人参皂苷Rd制备成微乳凝胶应用可以在较大程度上保障药物通过鼻脑通路进入脑组织中。本课题成功制备出人参皂苷Rd微乳及微乳凝胶,且大鼠鼻腔给药后,均可以提高药物的生物利用度和脑部药物的浓度,其中微乳凝胶的更高,这为人参皂苷Rd通过鼻腔给药以到达治疗缺血性脑卒中的目的奠定了基础。