论文部分内容阅读
研究目的: 1、构建可复制的糖尿病兔模型以模拟人体在糖尿病影响下椎间盘退变的过程 2、通过对糖尿病新西兰大白兔髓核组织细胞外基质成分含量的变化,探讨糖尿病对椎间盘髓核组织水分含量、蛋白聚糖、Ⅱ胶原蛋白及相关细胞代谢因子的影响及意义。 研究方法: 1、选取20只正常血糖值新西兰大白兔通过四氧嘧啶溶液耳缘静脉注射的方法诱导产生糖尿病模型,同条件另外20只同种大白兔注射生理盐水作为对照组。 2、测定两组不同时间段髓核组织水分含量,通过免疫印迹的方法检测蛋白聚糖、Ⅱ胶原蛋白的变化,通过实时定量PCR技术检测相关细胞代谢因子的mRNA的表达水平。 实验结果: 1、通过多次耳缘静脉注射四氧嘧啶溶液成功造成了糖尿病兔模型。 2、对照组兔椎间盘外层纤维环呈同心圆状排列,中央髓核则呈透明胶冻状,二者分界清晰。实验组兔椎间盘随时间呈退变发展,第4个月半透明胶冻状髓核固缩,至第6个月时可见有明显髓核萎缩,呈现为白黄色,不透明,与周围纤维环出现粘连分界不清。以髓核组织水含量值作为参考值,对照组兔髓核组织在实验期内髓核组织水含量值并没有明显变化,维持在(75.7士5.1)%。而实验组则水含量逐渐减少,第6个月时为(64.2士6.2)%,于对照组(74.4士5.4)%存在显著差异(P<0.05) 3、实验组新西兰大白兔椎间盘中aggrecan蛋白的表达量总体上随着实验进展而逐渐下降,第2个月时表达量达到最大值,第6个月时表达量降到最低;在对照组中aggrecan表达量也随着时间推移表达量逐渐下降。相同时间段实验组与对照组除初始的时间点和第2个月上没有显著差异外,其他2个时间点均存在显著差异。实验组新西兰大白兔椎间盘中Ⅱ胶原蛋白的表达量总体上也随着实验进展而逐渐下降,初始时间点表达量最高,第6个月表达量降到最低点。对照组实验组新西兰大白兔椎间盘中Ⅱ胶原蛋白的表达量也随时间推移下降,但与实验组表达量存在差异。 4、 MMP-3和BMP-2的mRNA水平与内参GAPDH的表达做比较。实验组新西兰大白兔椎间盘中MMP-3在4个月时mRNA水平表达迅速增高,为内参GAPDH的(7.6士1.9)倍,与同期对照组相比有显著差异(P<0.05),至第12周时达到最大值为内参GAPDH(8.5士1.3)倍,与对照组相比差异有统计学意义(p<0.05)。BMP-2在第2个月时表达升高至内参GAPDH的(5.4士2.1)倍,与对照组相比结果有显著差异(p<0.05),但此后又呈下降趋势,第6个月时大至降至造模前的水平(1.2士0.6)倍。 实验结论: 1、通过多次耳缘静脉注射四氧嘧啶溶液可造成稳定可复制糖尿病兔模型。 2、糖尿病可导致椎间盘内髓核组织中的水分含量、蛋白聚糖及Ⅱ胶原蛋白的含量下降,可能由于椎间盘内代谢障碍,引起退变相关因子增多,最终导致椎间盘退变。