目的:近年来,甲状腺癌的发病率逐年增高,在未来20年内甲状腺癌的发病数和死亡数均会呈现上升的趋势。甲状腺乳头状癌是甲状腺癌最常见的病理类型,大部分预后良好。为了避免过度诊断及过度治疗,对甲状腺结节鉴别诊断以及预后评估对临床进一步制定治疗方案至关重要。超声造影（contrast-enhanced ultrasound,CEUS）可以更好的探测肿瘤的微循环情况,现在已广泛应用于甲状腺疾病的诊断和治疗中,本研究应用CEUS对甲状腺结节进行鉴别诊断,并在CEUS中应用新的方法,提高CEUS对甲状腺结节的鉴别诊断能力。有研究表明,新生血管生成与肿瘤的发展、转移有关,本研究第二部分应用CEUS联合BRAFV600E基因对甲状腺癌颈部淋巴结转移进行相关性及多因素分析分析,对甲状腺癌进行预后的评估及预测。基因组印迹是哺乳动物胚胎发育过程中发挥重要作用的一种表观遗传调控因子,在疾病状态下,一些印迹基因的正常沉默拷贝可能通过去甲基化异常激活,这种现象通常被称为印迹丢失（loss of imprinting,LOI）,据报道在多种人类癌症中发生。人类鸟嘌呤核苷酸结合蛋白（guanine nucleotide binding-protein alpha-stimulating complex locus,GNAS）基因复合体表现出父系、母系和双等位基因表达的高度复杂的印迹模式,有证据表明GNAS基因的印记丢失可能增加甲状腺癌的风险。本研究第三部分应用中国甲状腺影像报告和数据系统（Chinese thyroid imaging reporting and data system,C-TIRADS）、CEUS、BRAFV600E基因联合印迹基因GNAS,对小于10mm的甲状腺结节进行诊断分析,以期提高甲状腺癌的诊断率。方法:选取125例甲状腺结节患者行CEUS检查,对甲状腺结节进行良恶性鉴别诊断。对结节的增强程度、增强均匀性、增强模式进行定性分析。选取其中85例符合定量分析要求的CEUS图像,应用Q-contrast软件生成造影拟合图,并自动画出时间强度曲线（Time-intensity curve,TIC）。计算峰值强度（Peak Intensity,PI）,达峰时间（Time to Peak,TTP）,斜率（Slope）,曲线下面积（area under the curve,AUC）,对CEUS图像进行定量分析。另选小于10mm的甲状腺结节共43例进行“Double-Flash”爆破后研究,选择CEUS模式进行动态观察,在40s和60s时按下“Flash”爆破按钮。应用Q-LAB软件对造影视频进行定量分析。软件自动画出时间强度曲线（TIC）。计算爆破前后的到达时间（arrival time,AT）,基础强度（basic intensity,BI）,TTP以及达峰强度PI,并计算斜率差与良恶性的差异性和相关性。将爆破前以及爆破两次后的数值代入Auto CAD 2015软件,画出爆破前后的斜率示意图,判断爆破前或爆破后的斜率是否平行,平行定义为吻合,不平行定义为不吻合。第二部分,选取行我院行甲状腺部分或全部切除术及淋巴结清扫术的患者,手术病理为甲状腺乳头状癌者共155例,首先进行甲状腺癌BRAFV600E基因与淋巴结转移相关研究。按照伴或不伴淋巴结转移分成两组。在淋巴结转移组中,再按照中央区淋巴结转移和多区淋巴结转移分为两组,比较各组BRAFV600E基因的表达情况。选取手术病理为甲状腺乳头状癌者,行甲状腺CEUS检查者共65例,行CEUS与PTC淋巴结转移相关性研究。其中,同时行BRAFV600E基因检测及CEUS检查者共55例。按照伴或不伴淋巴结转移分成两组。对淋巴结转移组和非淋巴结转移组年龄、性别、结节大小、CEUS、BRAFV600E进行差异及相关分析,研究CEUS参数和BRAFV600E与甲状腺癌淋巴结转移的关系。CEUS分析参数包括增强程度、增强模式、增强均匀性、到达时间和廓清时间。第三部分选取行甲状腺细针穿刺细胞学检查的患者（结节直径<10mm）,共59例患者,62个结节行印迹基因GNAS诊断甲状腺癌的相关研究,行常规超声、CEUS、BRAFV600E基因、GNAS印迹基因检查。常规超声应用中国甲状腺影像报告和数据系统（Chinese thyroid imaging reporting and data system,C-TIRADS）危险分层将结节进行分类。CEUS应用增强程度、增强模式、增强均匀性、到达时间和廓清时间对结节进行定性评估并诊断。BRAFV600E基因检测采用实时荧光定量PCR法和Ventana免疫组化法。GNAS印迹基因应用定量可视化印迹基因原位杂交检测,建立双等位基因、多等位基因、总等位基因表达评分并进行评估。患者均手术取得病理结果。结果:CEUS对甲状腺结节的鉴别诊断研究中,定性分析结果显示,恶性结节表现为造影剂到达时间晚于周边腺体组织,向心性增强,不均匀低增强,廓清时间早于周边腺体组织。良性结节表现为均匀高增强或等增强,增强边界清晰,周边伴规则高增强环。CEUS在直径大于等于10mm的甲状腺结节中,诊断效能高于直径小于10mm的结节。CEUS定量分析显示,恶性结节内部的峰值强度PI小于周边甲状腺组织,斜率（Slope）高于周边组织。良恶性结节之间定量参数无明显统计学差异。“Double-Flash”定量分析显示,在小于10mm的结节中,大部分的恶性结节呈低增强（67%）,在第一次爆破之后的斜率与爆破前不吻合（89%）（爆破后的灌注斜率与爆破前不平行）。在良性结节中,定性分析中低增强,不均匀增强,等增强,高增强分别占比56%,0%,25%和19%。爆破后斜率有88%的病例是吻合的（爆破后的灌注斜率与爆破前平行）。CEUS定性分析的敏感度、特异性和准确度分别是70.0%53.8%和65.1%。定量分析“Double-Flash”的敏感度、特异性和准确度分别为92.3%,82.3%和88.4%。在恶性结节中,爆破一次后的斜率减低,差异有统计学意义（P<0.05）。Slope 1和Slope 2无明显统计学差异。在良性结节中,斜率无明显变化（P>0.05）。爆破一次后的斜率差与结节的良恶性有统计学差异和相关性。第二次爆破后斜率差在良恶性结节之间无明显的差异和相关性。第二部分预后相关分析中,BRAFV600E基因突变在甲状腺癌颈部淋巴结转移组和非转移组无明显统计学差异（P>0.05）。BRAFV600E基因突变与颈部淋巴结转移无明显相关性,与转移淋巴结分区无明显相关性（P>0.05）。年龄、结节大小、CEUS增强程度与颈部淋巴结转移有相关性（P<0.05）。高或等增强提示发生淋巴结转移的风险性增加。第三部分印迹基因GNAS联合诊断分析中,C-TIRADS诊断的敏感度,特异度,准确率分别为81.5%,54.3%,66.1%。CEUS诊断的敏感度,特异度,准确率分别为76.5%,88.9%,67.7%。GNAS印迹基因诊断的敏感度,特异度,准确率分别为74.4%,80%,75.8%。BRAFV600E基因诊断的敏感度,特异度,准确率分别为91.3%,57.5%,71.0%。C-TIRADS联合CEUS,诊断的敏感度、特异度和准确率分别为72.5%,90.9%,75.8%。与常规超声相比,特异度和准确率都有提高（P<0.05）。BRAFV600E基因联合GNAS基因,诊断的敏感度、特异度和准确率分别为70.4%,100%,82.1%。与单独的GNAS或单独BRAFV600E基因诊断相比,特异度和准确率的提高都有统计学差异（P<0.05）。结论:CEUS可以提高常规超声在甲状腺结节中的诊断能力。我们的研究表明“Double-Flash”可以很好的提高CEUS在小于10mm的甲状腺结节中的诊断敏感度和准确率。CEUS高增强或等增强与PTC淋巴结转移有关。GNAS印迹基因与BRAFV600E联合诊断,可以提高GNAS单基因或BRAFV600E单基因的诊断能力。