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目的:银屑病是一种常见的慢性复发性炎症性皮肤病,目前其发病机制尚未十分明确,且无完全治愈的方法,寻找新的治疗靶点至关重要。研究发现银屑病患者代谢综合征患病率较健康者高。FTO基因SNP与肥胖、高血压及空腹血糖异常存在显著相关性,FTO蛋白也是m6A去甲基酶之一。因此,本实验以脂多糖(LPS)诱导的角质形成细胞的炎症模型以及咪喹莫特(IMQ)所诱导的小鼠银屑病样皮炎为研究对象,探讨FTO对银屑病发病是否有影响及其作用机制。方法:1.角质形成细胞分为两组:(1)Normal组:正常培养;(2)LPS组:给予LPS刺激24小时诱导炎症模型。2.qRT-PCR检测角质形成细胞中FTO的表达水平;Western blot检测角质形成细胞中FTO表达量。3.IMQ诱导小鼠银屑病模型,10只雌性BALB/c小鼠随机分为两组:(1)实验组:小鼠连续7天外用IMQ乳膏。(2)对照组:连续7天外用等量凡士林乳膏。4.切取小鼠的背部皮损,观察小鼠皮损病理学镜下改变,行qRT-PCR、Western blot共同检测小鼠皮损组织中FTO的表达量。5.IMQ诱导小鼠银屑病模型,15只雌性BALB/c小鼠随机分为三组:(1)实验组:小鼠连续7天应用IMQ乳膏,并且在第1天和第4天分别皮内注射FTO沉默慢病毒。(2)模型组:小鼠给予IMQ处理,同时在第1天和第4天皮内注射相同滴度的阴性对照病毒。(3)对照组:连续7天外用凡士林乳膏,在第1天和第4天皮内注射相同滴度的阴性对照病毒。应用临床银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)客观评分系统评估小鼠背部皮损炎症程度。6.以眼球取血法取小鼠外周血,切取小鼠背部皮损,观察小鼠皮损病理学镜下改变,行免疫组化、Western blot共同检测小鼠皮损组织中FTO的表达量,采用qRT-PCR检测小鼠皮损中炎性因子表达水平,采用ELISA的方法检测小鼠外周血血清中炎症因子的表达水平。7.Western blot检测IMQ诱导的银屑病样皮炎小鼠及正常对照组小鼠皮损中m6A甲基转移酶及去甲基酶表达量。结果:1.体外实验中,我们通过qRT-PCR、Western blot发现LPS诱导的角质形成细胞内FTO表达水平较对照组均明显升高。2.体内实验中,肉眼可观察到实验组小鼠背部有大片红斑基础上覆盖白色鳞屑,而对照组小鼠背部无可见皮损。HE染色结果显示:实验组可观察到表皮角化过度、表皮突延长、角化不全、棘层肥厚。对照组未见明显异常。qRT-PCR、Western blot结果显示:实验组小鼠皮损中FTO量较对照组明显增多。3.体内实验中,肉眼可观察到实验组小鼠背部可见大片红斑基础上覆盖白色鳞屑,模型组小鼠背部皮损程度较轻,而对照组小鼠背部无可见皮损。HE染色结果显示:实验组可见表皮角化过度、表皮突延长、角化不全、棘层肥厚。模型组可见角化过度、棘层肥厚等,但程度低于模型组。对照组未见明显异常。免疫组化结果显示:模型组小鼠皮损组织中角质形成细胞核中FTO存在高表达,表现为棕色的颗粒。实验组小鼠表皮细胞核中FTO表达水平较模型组明显降低,而对照组角质形成细胞核中未见明显棕黄色颗粒。Western blot结果显示:模型组小鼠皮损中FTO量较对照组明显增多,实验组小鼠皮损中FTO量较模型组明显减少,但高于对照组。PCR结果示:实验组小鼠皮损炎症因子IL-17、IL-23均高于模型组,实验组、模型组皮损炎症因子IL-17、IL-23均高于对照组。ELISA结果显示:实验组小鼠血清炎症因子IL-17高于模型组,实验组、模型组血清炎症因子IL-17均高于对照组。4.体内实验中可观察到实验组小鼠皮损中m6A甲基化酶METTL4、WTAP,去甲基化酶FTO、ALKBH5表达均高于对照组,但FTO表达差异是最显著的。结论:我们的研究结果显示FTO可能是银屑病发病过程中的重要环节,可能通过去甲基化酶功能对银屑病起到保护作用。