【摘 要】
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细胞质雄性不育(cytoplasmic male sterility,CMS)指的是在某些雌雄同体的被子植物中,雌性器官发育正常,而雄性器官发育异常,不能产生有活性雄配子的母性遗传现象。本实验室
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细胞质雄性不育(cytoplasmic male sterility,CMS)指的是在某些雌雄同体的被子植物中,雌性器官发育正常,而雄性器官发育异常,不能产生有活性雄配子的母性遗传现象。本实验室前期在红莲型细胞质雄性不育(HL-CMS)不育系水稻粤泰A(YTA)中发现了1个与不育相关的基因HL-sp1,早先预测编码1个216氨基酸的ORF216蛋白,Western检测其在不育水稻体内的表达产物分子量大于预测的ORF216;基于ORF216的Pull Down捕获到3个候选互作蛋白。本文进一步研究了HL-sp1编码蛋白及其与1个候选互作蛋的作用,取得了以下主要进展:1.对HL-sp1的DNA序列进行分析,预测了1个大小为316个氨基酸的潜在表达产物,并通过在YTA c DNA的扩增检测得到了相应的转录产物。2.分别构建ORF316以及ORF216瞬时表达载体p M999-orf316和p M999-orf216,通过转化水稻原生质体对ORF316以及ORF216蛋白进行亚细胞定位。定位结果证实ORF316蛋白定位于水稻细胞线粒体上,而ORF216则定位于细胞质中。3.使用重叠PCR方法成功克隆得到水稻线粒体蛋白合成延长因子ef-tu基因,构建p GEX4T1-ef-tu融合表达载体并进行原核表达,在28℃条件下成功诱导出EF-Tu原核表达蛋白。4.成功构建了pET32a-orf316原核表达载体并转化E.coli,ORF316诱导表达的最适温度为25℃。用Ni-亲和层析柱和Western检测成功分离纯化得到ORF316。但GST Pull-Down未证实原核表达蛋白ORF316与OsEF-Tu的体外互作。
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