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’海沃德’属于较耐贮藏的猕猴桃品种,但其贮藏机理鲜有报道。本试验以miRNA为切入点,对’海沃德’猕猴桃采后第1天(DAP1,采摘当天)第15天(DAP15,乙烯释放高峰)第24天(DAP24,乙烯释放结束)三个时期的果实样本进行Small RNA测序,得到’海沃德’猕猴桃后熟期间miRNA的种类及表达量,并对miRNA的靶基因及其功能进行预测。同时,为验证测序的准确性,对调控猕猴桃乙烯代谢、生长素(IAA)代谢、脱落酸(ABA)代谢通路上6种表达量变化较大的miRNA进行表达量的验证。为了深入研究这6种miRNA对植物内源激素的调控作用,采用乙烯利、ABA、1-甲基环丙烯(1-MCP)对’海沃德’称猴桃进行处理,并对miRNA的变化进行定量分析。初步揭示了’海沃德’果实后熟期miRNA的种类,各阶段表达量及其与靶基因之间的变化关系,为研究’海沃德’猕猴桃比较耐贮藏机理奠定了基础。获得的主要结果与结论如下:一、对’海沃德,称猴桃后熟三个不同时期进行Small RNA测序对适时采收的’海沃德’猕猴桃样本在DAP1、DAP1及DAP24三个时期进行Small RNA测序。经测序分析,在DAP1时期鉴定到已知miRNA145个,新miRNA576 个;DAP15 时期鉴定到已知 miRNA137 个,新 miRNA522 个;DAP24时期鉴定到miRNA164个,新miRNA1739个。miRNA的数量在后熟末期最高,但是总表达量在后熟末期最低,表明miRNA在’海沃德’猕猴桃后熟过程中具有重要作用。二、miRNA的靶基因预测针对miRbase中有注释的miRNA进行靶基因预测,采用psRobot和TargetFinder两个软件预测,取其交集,结果显示,在DAP1期107个miRNA共有靶基因1108个;DAP15期118个miRNA共有1175个靶基因;DAP24期164个miRNA共有靶基因数量3149个。在DAP1期576个新miRNA共有靶基因2896个;DAP15期522个新miRNA共有3176个靶基因;DAP24期,1739个miRNA共有靶基因数量8871个。靶基因的预测及KEGG通路注释为后续的试验奠定基础。三、与’海沃德’猕称桃后熟相关的miRNA的表达量验证根据测序结果,选取与乙烯代谢、IAA代谢、ABA代谢相关且变化量较大的miRNA,共 6 个,分别是 miR7545、miR5158、miR172c-3p、miR162a-3p、miR8129-5p和miR9484,采用Real-time PCR方法对miRNA表达进行验证,结果显示6个miRNA的表达量趋势与测序结果相一致,表明测序结果可靠。四、乙烯利、ABA、1-MCP处理对’海沃德’猕猴桃后熟相关的6个miRNA表达差异的影响用乙烯利、ABA、1-MCP三种方式处理适时采收的’海沃德’猕猴桃,在60天后熟期间测定上述6种miRNA含量。结果显示,乙烯利处理后,miR162a-3p和 miR8129 在 DAP7 期与 CK 组有极显著差异(p<0.01),miR172c-3p 和 miR7545在DAP40期与CK组有极显著差异(p<0.01),miR9484在DAP7-DAP58期间与CK组相比均有极显著下降(p<0.01),miR5158在DAP40-DAP58期间与CK组相比均有极显著下降(p<0.01)。ABA处理组,miR162a-3p在DAP40-DAP58期间表达量上调,达到极显著水平差异(p<0.01),miR172c-3p在DAP58极显著下降(p<0.01),miR7545 在 DAP7 和 DAP58 时期极显著上升(p<0.01),miR9484 在DAP7时期极显著上升(p<0.01),miR8129显示出和CK组完全不同的表达趋势在DAP7-DAP40期间下调,miR5158在DAP40的表达量与CK组比较有极显著差异(p<0.01)。1-MCP 处理组,miR8129 在 DAP18-DAP40 期间极显著上调(p<0.01),miR172c-3p、miR7545、miR5158的表达均呈现不同程度的下调。处理后该6种miRNA的变化表明激素合成与信号传导可以受miRNA的调控,同时miRNA的表达又受激素调控。五、miR9484和miR7545的靶基因PYR/PYL、P2C、ABF在三种处理下的表达变化试验同时研究了 miR9484和miR7545对ABA信号传导的影响。用乙烯利、ABA、1-MCP处理适时采收的’海沃德’猕猴桃果实,研究ABA信号通路上关键基因的表达。结果显示,1-MCP处理组对于PYR/PYL(Achn125031)、PP2C(Achn236131)、ABF(Achn16621)表达量影响较大,后熟期间三种基因的表达量均高于CK,达到极显著水平(p<0.01)。与CK相比,ABA处理组中,ABF、PYR/PYL表达量有所上升,PP2C表达量下调。乙烯利处理组中,PP2C和ABF表达量在后熟中期和后期有所下降,PYR/PYL表达量在后熟中期有所上升。表明1-MCP、ABA处理对’海沃德’猕猴桃ABA信号传导有较大影响。