【摘 要】
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木质素是自然界中最丰富、最廉价的可再生能源之一。木质素具有多种降解途径,其中生物降解是目前公认的降解木质素的最有效途径,木质素的生物降解在各个行业都有广泛的应用前景,当今许多课题都围绕着如何筛选出高效的木质素降解菌株以及催生出更高的木质素酶活性。本文从生境中筛选出具有高效木质素降解能力的菌株,从培养时间、培养温度、溶解氧、接菌量、初始pH值中确定了对菌株分泌木质素酶漆酶(Laccase,Lac)酶
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木质素是自然界中最丰富、最廉价的可再生能源之一。木质素具有多种降解途径,其中生物降解是目前公认的降解木质素的最有效途径,木质素的生物降解在各个行业都有广泛的应用前景,当今许多课题都围绕着如何筛选出高效的木质素降解菌株以及催生出更高的木质素酶活性。本文从生境中筛选出具有高效木质素降解能力的菌株,从培养时间、培养温度、溶解氧、接菌量、初始pH值中确定了对菌株分泌木质素酶漆酶(Laccase,Lac)酶活、木质素过氧化物酶(Lignin peroxidase,Lip)酶活、锰过氧化物酶(Mn dependent peroxidase,Mnp)酶活影响最大的因素及其最优范围,并通过响应面法优化了菌株的产酶条件。通过研究得出以下结论:(1)初筛得到30株具有木质素降解能力的菌株,复筛得到具有较强木质素降解能力的9株菌株。通过比较产Lac、Lip、Mnp三种酶能力强弱,挑选出4株高效木质素降解菌株,并分别鉴定为蓝状菌属真菌Talaromyces siamensis MJ1、青霉菌Penicillium sp.MJ8、疣孢篮状菌Talaromyces verruculosus MJ9、黄柄曲霉Aspergillus flavipes MJ26。(2)对4株高效木质素降解菌株进行单因素实验得出,当培养时间为6d时,各个菌株的产Lac、Mnp能力达到最佳,培养时间为10d时,产Lip能力达到最佳;菌株MJ1和MJ26的最佳产酶温度范围为25-35℃、最合适的产酶温度为30℃,菌株MJ18、MJ9的最佳产酶温度范围为30-40℃、最合适的产酶温度为35℃;菌株MJ1、MJ8、MJ9、MJ26在摇床转速为120r/min的培养条件下产酶效果更好;菌株MJ1、MJ26的最佳产酶接菌量范围为1-4%,最合适的产酶接菌量为2%,菌株MJ8、MJ9的最佳产酶接菌量范围为2-6%,最合适的产酶接菌量为4%;菌株MJ1、MJ9、MJ26的最佳产酶pH值范围为4-6,MJ8为5-7,菌株MJ1、MJ9、MJ26最合适的产酶pH值为5,MJ8为6。对4株菌产酶能力影响最大的3个因素为温度、接菌量、pH。(3)通过Box-Behnken试验设计和响应面分析对菌株MJ1、MJ8、MJ9、MJ26的产酶能力进行分析和优化,对各个因素对菌株产酶能力影响的交互作用及影响强弱作出了具体分析。通过软件预测出MJ1的最佳产酶培养条件为温度30.1℃、接菌量1.66%、pH 5.2,该条件下的 Lac、Lip、Mnp 三种酶活分别为 109.39、119.47、227.75U;MJ8的最佳产酶培养条件为温度34.1℃、接菌量4.58%、pH 5.8,该条件下的Lac、Lip、Mnp三种酶活分别为78.86、91.33、152.32U;MJ9的最佳产酶培养条件为温度35.7℃、接菌量 3.97%、pH5.0,该条件下的 Lac、Lip、Mnp 三种酶活分别为 62.64、98.41、196.14U;MJ26的最佳产酶培养条件为温度30.6℃、接菌量2.31%、pH 5.2,该条件下的Lac、Lip、Mnp三种酶活分别为66.02、76.30、175.83U。通过实验验证优化条件下的木质素酶活和模拟预测的结果相差较小,表明优化结果可靠。本研究从生境中筛选出4株具有高效木质素降解能力的菌株,并通过单因素和响应面法优化了这4株菌的产木质素水解酶的能力,为高效木质素降解菌的产酶发酵提供思路,为生物法大规模降解木质素提供参考,也为后续其它相关研究奠定基础。
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