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microRNA（miRNAs）是一类长度约为22nt的内源性单链非编码小RNA分子，其通过靶向降解mRNA或者抑制蛋白的翻译以在动物及植物中发挥重要的调控作用。miRNA在调控许多基本的生物学进程中均发挥着重要作用，包括细胞增殖、分化、凋亡，神经形成，生物体发育以及肿瘤的发生发展等。腺垂体是机体内重要的内分泌器官，目前关于miRNA对垂体发育及功能调控的研究甚少。本研究应用荧光定量PCR技术检测miR-375、miR-7、miR-362-5p、miR-182、miR-137、miR-125a、miR-148a、miR-379、miR-30d、miR-143、423-5p、miR-26a等在牛不同组织中的相对表达水平，以筛选出在腺垂体中特异表达或倾向表达的miRNA并利用TargetScan、RNA22等当前应用较为广泛的靶基因预测软件对其靶基因进行分析预测，最后通过双荧光素酶检测系统选择性地对与垂体功能或繁殖性状相关的候选靶基因进行识别验证。研究结果表明，miR-375、miR-7、miR-182、miR-362-5p、miR-137、miR-148a、miR-379、miR-30d、miR-143、423-5p、miR-26a均在各组织中有不同程度的表达。miR-375、miR-7、miR-182、miR-125a在腺垂体中的表达水平相对较高，值得注意的是miR-375、miR-7在腺垂体中具有倾向性表达的特点，其在腺垂体中的表达量与其它组织相比差异极其显著（p＜0.01）。因此，本实验选择miR-7和miR-375对其在腺垂体中的功能进行进一步的研究。通过生物信息学方法分析发现BMPR2、PTGFRN、GnRHR、FSHβ、SSTR1、IL1β存在miR-7的结合位点，BMPR2、Leptin基因中存在miR-375的结合位点，提示这些基因可能受miR-7或miR-375调控。双荧光素酶报告基因检测结果表明，miR-7可以调控PTGFNR的表达，miR-375能够调控BMPR2的表达。突变重组质粒与miRNA共转染NIH3T3细胞系，双荧光素酶报告基因检测结果表明，靶基因序列中与种子区域结合的序列3-5个碱基突变后miR-7对海肾荧光素酶活性的抑制由野生型的75%降至10%，而miR-375几乎失去了对海肾荧光素酶活性的抑制，说明GTCTTCC为miR-7与PTGFRN靶序列的作用位点，序列GAACAAA为miR-375与BMPR2靶序列的作用位点。综上所述，本研究分析了miR-7以及miR-375等12种miRNAs在牛不同组织中的表达规律。结果表明miR-7以及miR-375在腺垂体中的表达具有倾向性并且通过双荧光素酶检测系统在体外证实了PTGFRN为miR-7的一个靶基因，miR-375为BMPR2的一个靶基因。以上结果为进一步的研究miR-7和miR-375对垂体的发育、激素分泌以及其它功能可能发挥的调控作用提供了理论依据。