基于“肺阳虚”理论的温阳化饮方对哮喘寒饮蕴肺证模型大鼠细胞自噬及相关通路的作用机制研究

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目的:研究哮喘寒饮蕴肺证大鼠细胞自噬水平以及PI3K-AKT-mTOR信号通路的表达情况,探讨细胞自噬以及PI3K-AKT-mTOR信号通路在哮喘寒饮蕴肺证发病中的作用机制。并通过客观指标探讨“肺阳虚”在哮喘寒饮蕴肺证发病过程中的病理表现,进一步阐明温阳化饮方(小青龙汤加人参和黄芪)对哮喘寒饮蕴肺证的治疗机制,为科学而合理的确立治则和指导临床用药提供依据。方法:采用理论探讨与实验研究相结合的方法,从中医气理论、阴阳理论及病因病机理论等角度对“肺阳”和“肺阳虚”理论加以阐述,并且在此基础上丰富和完善中医理论。在实验研究方面,通过各组药物干预治疗并引入HE染色病理切片、PCR荧光检测、Western Blot免疫印迹等方法。确定与哮喘寒饮蕴肺证的治疗相关联的PI3K-AKT-mTOR信号通路的病理机制及相关炎症因子,完善中药黄芪多糖、人参皂苷、小青龙汤及温阳化饮方治疗哮喘寒饮蕴肺证的研究方法,探索哮喘寒饮蕴肺证动物模型研究的新模式。并且借助微观指标,对比研究温阳化饮方、人参皂苷、黄芪多糖和小青龙汤对哮喘寒饮蕴肺证的治疗机制是否相同。结果:本文通过对“肺阳”及“肺阳虚”相关理论的分析探讨,证实了“肺阳”的存在。发现了“肺阳虚”会进一步影响细胞自噬的水平,使得自噬水平降低和气道炎症水平的提高,导致哮喘寒饮蕴肺证的发病或病情加重。并且证实了温阳化饮方可作用于PI3K-AKT-mTOR信号通路,进而调节ATG、LC3等自噬相关蛋白使得细胞自噬水平趋于正常,这可能是温阳化饮方治疗哮喘主要机制。从微观角度观察发现哮喘寒饮蕴肺证大鼠模型的HE染色病理切片、RT-PCR荧光定量检测、WB蛋白印迹检测以及支气管相关炎症因子等指标与正常组大鼠相关指标两者具有显著性差异。并且与模型组相比较,中药黄芪多糖组、人参皂苷组、小青龙汤组和温阳化饮方组大鼠从形态和体征上均有着明显的差异,各项微观指标也都有着不同程度的改善。结论:从理论角度探讨了“肺阳”的生理功能可以归纳为温煦机体、防御外邪、主司肺气之宣发、调节全身水液输布和代谢等几个方面,且“肺阳”与其他脏腑阳气在生理和病理上有着密切的联系。通过实验研究证实了温阳化饮方可以通过调节PI3K-AKT-mTOR信号通路,进而影响了ATG和LC3等细胞自噬相关基因,显著提高寒饮蕴肺证大鼠肺组织的细胞自噬水平,对哮喘寒饮蕴肺证气道炎症可以起到一定的治疗作用。此外,大鼠肺组织中自噬基因表达和PI3K-AKT-mTOR信号通路的相关蛋白表达也进一步证实了温阳化饮方在治疗哮喘寒饮蕴肺证方面优于小青龙汤主要原因在于黄芪多糖和人参皂苷对于哮喘寒饮蕴肺证肺组织细胞自噬和炎症水平的调节,这也证明了多味药物联合应用更能够发挥出最佳的治疗效果;这对于中医理论的发展和哮喘寒饮蕴肺证的临床治疗具有重要的意义。
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