汉黄芩素在Wnt/β-catenin信号通路中抑制人乳腺癌细胞增殖、迁移侵袭

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目的:本课题旨在研究中药汉黄芩素对体外培养的人乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF-7)增殖、迁移侵袭的影响以及可能存在的作用机制。方法:本实验选择常规有代表性的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7作为研究对象,在体外培养人乳腺癌细胞至对数生长期。选取不同浓度梯度汉黄芩素作用于乳腺癌细胞,培养一段时间后(24h、48h、72h),MTS比色法绘制乳腺癌细胞增殖曲线,计算药物的抑制率以及药物的半数抑制浓度(IC50),检测汉黄芩素对人乳腺癌细胞体外增殖的影响;细胞克隆实验,检测汉黄芩素对MDA-MB-231、MCF-7细胞体外集落形成能力的影响;Transwell小室实验,检测汉黄芩素对MDA-MB-231、MCF-7细胞体外迁移和侵袭能力的影响;细胞划痕实验进一步检测汉黄芩素对人乳腺癌细胞迁移能力的影响;Western blot(免疫蛋白印记)实验以及qRT-PCR(实时荧光定量)实验,检测汉黄芩素对MDA-MB-231、MCF-7人乳腺癌细胞中TERT(端粒酶逆转录酶)蛋白以及mRNA水平表达的影响;Western blot实验以及qRT-PCR实验,检测汉黄芩素对乳腺癌细胞经典Wnt/β连环蛋白通路信号分子蛋白以及mRNA水平表达的影响。结果:1.汉黄芩素在体外抑制人乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF-7)2.汉黄芩素可以抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移和侵袭的能力;3.人乳腺癌细胞MCF-7本身不具有迁移/侵袭的能力;4.汉黄芩素在乳腺癌细胞中发挥其抑癌作用的机制与经典Wnt/β-catenin信号通路相关;5.汉黄芩素可以降低人乳腺癌细胞TERT的表达,抑制乳腺癌细胞生长。结论:汉黄芩素在体外细胞水平发挥着良好抑制MDA-MB-231、MCF-7人乳腺癌细胞增殖、迁移侵袭的作用,并通过经典Wnt/β-catenin信号通路与发挥其抑癌作用。
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