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目的1、探索NOD1/NOD2介导的天然免疫应答对小鼠体内HBV复制影响及其可能机制。2、研究肝窦内皮细胞（LSEC）在NOD1/NOD2受体介导的抗HBV免疫应答中的作用和机制。方法1、尾静脉高压水注射pAAV/HBV1.2质粒建立慢性HBV复制小鼠模型，并以尾静脉高压水注射方式把NOD1/NOD2配体直接导入肝内。2、按既定时间点采取小鼠血标本，并取肝组织及脾组织。用定量ELISA检测血清HBsAg和HBeAg，定量real time-PCR检测血清中HBVDNA水平；ELISPOT检测脾细胞中特异性分泌IFNγ细胞数；用免疫组织化学方法检测肝组织中HBcAg的表达。3、用胶原酶灌注与抗-LSEC免疫磁珠分离方法分离C57BL/6小鼠LSEC。4、应用Real-time RT-PCR检测基础水平LSEC中NOD1/NOD2的表达。5、用C12-ieDAP、MDP、ssRNA40配体刺激LSEC,6h,20h收集细胞及细胞上清，定量RT-PCR检测：NOD1、NOD2、IL-6、RIP2、TNFα、CXCL-1、CXCL-2、CXCL-9、CXCL-10、CCL-2、CCL-3、CCL-5；ELISA检测细胞上清中的细胞因子：IFNα/β/γ、TNF-α、IL-1β、IL-6、, IL-18；流式细胞术检测细胞表面分子：PD-L1、CD40、CD86、MHCII、CD106、CD54、CD80。6、Graphpad软件作图，SPSS18.0对数据进行统计分析。结果1、NOD1配体C12-ieDAP（20μg/只）高压水注射处理明显抑制了慢性HBV复制小鼠血清中HBsAg、HBeAg及HBVDNA，肝组织中HBcAg表达也被抑制。而NOD2配体MDP处理时未发现有抑制HBV复制效应，其余注射方法均未观察到体内的抗HBV效应。2、NOD1配体C12-ieDAP高压水注射处理后，脾脏中HBcAg特异的分泌IFN-γ细胞数显著增加。3、基础状态下LSEC中NOD1呈高度表达，而NOD2表达水平相对较低。4、NOD1配体C12-ieDAP激活LSEC诱导NOD1、RIP2、IL-6、CXCL-1、CXCL-2、CXCL-9、CCL-2和CCl-5等mRNA水平上调；NOD2配体MDP激活LSEC诱导RIP2和IL-6mRNA水平上调；ssRNA40（可能通过NOD2途径）刺激LSEC诱导RIP2、CXCL-2、CXCL-9、CXCL-10、CCL-2与CCl-5等mRNA水平上调。5、NOD1与NOD2配体刺激诱导LSEC细胞因子的产生：C12-ieDAP10μg/ml刺激时有IFN-γ效应分子产生；IL-6效应分子在不同配体不同浓度刺激下均有所产生，其中C12-ieDAP10μg/ml、MDP10μg/ml、ssRNA400.2μg/ml刺激下可产生高水平IL-6。而其它细胞因子（IL-1β、IL-18、TNF-α、IFN-α和IFNβ）均未检测到。6、LSEC受C12-ieDAP(NOD1配体)刺激后CD40、CD86和PD-L1上调，未发现MHCII、CD106、CD54和CD80上调。且在5μg/ml浓度刺激下，CD40和CD86上调较明显；在2μg/ml浓度刺激下，PD-L1上调较明显。MDP（NOD2配体）刺激后CD40、CD86和PD-L1上调，未发现MHCII、CD106、CD54和CD80上调。且在5μg/ml浓度刺激下，CD40、CD86和PD-L1上调较明显。ssRNA40刺激后PD-L1上调，未发现CD40、CD86、MHCII、CD106、CD54和CD80上调。结论1、在慢性HBV复制小鼠模型中，NOD1激动剂在肝内具有抗HBV效应，而NOD2激动剂或肝外途径运用NOD1激动剂均无抗HBV效应。2、NOD1和NOD2在LSEC中功能性表达，均能被其配体激活，并介导NF-κB信号途径活化产生IL-6效应分子及一系列趋化因子；NOD1还介导产生IFN-γ效应分子，而NOD2无此免疫应答效应。3、NOD1介导的天然免疫应答对HBV复制影响可能通过介导炎症反应，募集中性粒细胞，产生IFN-γ以及调控HBcAg特异性的获得性免疫应答发挥作用。本研究的创新点1、发现NOD1介导的天然免疫应答可以抑制对小鼠体内HBV复制。2、研究了LSEC中NOD1与NOD2介导的信号途径及其天然免疫应答效应。3、初步阐明了NOD1介导的抗HBV效应及其可能机制。本研究的意义1、揭示了LSEC中NOD1与NOD2是肝脏内天然免疫的重要组成部分，与肝脏的炎症、感染性疾病的发病密切相关。2、NOD1参与了肝内抗HBV免疫应答，为探索NOD1激动剂作为免疫调节剂和疫苗佐剂的应用前景以及为抗病毒免疫干预新策略的研究提供理论依据。