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种子是大部分药用植物的主要繁殖器官,也是中药材一个重要的组成部分,在中医防治疾病的过程中发挥着重要作用。种子类药材因其体积小、肉眼难以分辨,市场上掺伪和来源不明等问题时有发生,严重影响临床用药安全和疗效发挥;谷物芽类药材在防治疾病方面具有一定功效,各谷物芽类药材功效各有侧重,且常与混伪品相互混淆,为解决这些问题,亟需寻找能够快速准确鉴定种子类和谷物芽类药材的新方法。近年来,中草药DNA条形码生物鉴定体系已初步建立,对中药材及药用植物的鉴定具有重要理论指导和应用价值,对解决我国生药鉴定的重大科技难题具有重大意义。本文以2015年版《中国药典》收载的51种种子药材的64种基原植物和3种谷物芽类药材的3个基原植物为主要研究对象,以ITS2序列为主,psbA-trnH序列为辅对种子类和谷物芽类药材进行DNA条形码分子鉴定,并用于市场流通中的种子类药材检验,同时结合高分辨率熔解曲线(HRM)技术对种子类药材掺伪鉴定进行探索研究。1.采用试剂盒法提取种子类药材的基原植物总DNA,通过PCR扩增其ITS2序列或psbA-trnH序列并双向测序。应用CodonCode Aligner v 4.2.5对测序峰图进行校对拼接,去除低质量序列及引物区获得ITS2序列或psbA-trnH序列,并通过建立的中药材DNA条形码数据库对市场种子类药材进行检测,结果显示大部分种子类药材为正品,小部分为各自的混伪品,本研究为保证种子类药材临床准确安全用药提供依据。2.采用试剂盒法提取谷物芽类药材的基原植物及其混伪品总DNA,通过PCR扩增其ITS2序列并双向测序。应用CodonCode Aligner v 4.2.5对测序峰图进行校对拼接,去除低质量序列及引物区获得ITS2序列,用MEGA 6.0软件对所有10个物种74条序列计算种内和种间K2P(Kimura 2-parameter)遗传距离,分析变异位点并构建系统邻接(Neighbour-Joining tree,NJ)树。结果表明稻芽、谷芽和麦芽的基原植物稻、粟和大麦的种内最大K2P遗传距离均远小于其与混伪品之间的种间最小K2P遗传距离;NJ树结果显示稻、粟和大麦各自聚为一支,均与混伪品明显区分开,各混伪品物种也单独聚为一支,本研究为保障谷物芽类药材临床准确用药提供了新的技术手段。3.采用DNA条形码与高分辨率熔解曲线技术结合对天仙子及其混伪品、桃仁和苦杏仁鉴定,并对其掺杂最低检测限进行探索,结果表明天仙子与其混伪品能够很好的区分。对天仙子与沙苑子的DNA混合、苦杏仁与桃仁的种子混合检测,结果显示不同比例的掺杂检测结果呈现出良好的线性关系(相关系数r前者为0.9758,后者为0.9685),HRM的最低检出限为1%,说明HRM方法有较高的灵敏度,为种子掺伪检测提供有效手段。综上所述,中药材DNA条形码分子鉴定法以及结合高分辨率熔解曲线技术能够对种子类和谷物芽类药材与相应混伪品的有效鉴定及掺伪鉴定,为其他重要中药材鉴定研究提供新方法,有利于规范药材市场,为保障临床用药安全奠定基础。