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人类特发性炎症性肌病（Idiopathic inflammatory myopathies，IIM）是一组以对称性近端肌无力以及淋巴细胞浸润未坏死横纹肌纤维表现为特征的骨骼肌炎性疾病，具有异质性和获得性，多发性肌炎（PM）为其中一亚型［15］。由于本病的发病机制目前仍不清楚，因此没有有效的治疗方法。临床上用于治疗PM的药物可以在一定程度上缓解病情发展，但由于其副作用大，疗效有限，治疗时间长，因此迫切需要系统深入的阐明PM的确切发病机制［6］。近年来，对PM发病机制知之甚少的一个重要原因是缺少合适的动物模型。我们用增大剂量异种动物骨骼肌提取的肌浆球蛋白免疫动物以及接种PT已成功诱导出实验性自身免疫性肌炎模型。该模型具有耗时短，重复率高等优点。这就为研究特发性炎症性肌病，探索新的治疗提供了很好的实验工具。既往研究提示PM为T淋巴细胞介导为主的自身免疫性疾病［45］。而Th17细胞是2005年发现的一种不同于Th1和Th2细胞的第三种效应性CD4+T细胞亚型，Th17细胞在清除病原微生物中发挥重要作用，同时在组织炎症和多种自身免疫性疾病的发生过程中起到重要的作用［713］。RORγt是Th17细胞的主要但非特异性转录因子，且其在Th17细胞的分化过程中起到重要作用［1415］。然而Th17细胞是否参与PM及EAM发病？目前还没有相关报道。雷帕霉素（RAPA）是一种新型的免疫抑制剂，能够抑制IL-6、IFN-γ等诱导的淋巴细胞增殖，包括抑制Th17增殖［1618］。近年来用以治疗移植排斥反应和多发性硬化等自身免疫性疾病［1927］，但是否可以治疗多发性肌炎，也未有报道。目的探索Th17细胞是否参与人类多发性肌炎及小鼠EAM模型的发病过程，并用雷帕霉素对小鼠EAM模型进行干预，观察Th17细胞变化。初步探索IIM免疫学发病机制，并为可能的治疗方法提供新的策略。方法第一部分：多发性肌炎患者肌肉组织中Th17细胞的浸润。收集近两年我科收治的疑似多发性肌炎患者的肌肉标本，免疫荧光法证实MHC-I类分子在肌纤维膜上有表达且CD8+T淋巴细胞侵犯未坏死肌纤维来确诊为多发性肌炎（16例）。对照组选择无特发性肌炎临床表现且组织学正常的非肌炎患者肌肉活检标本。获取肌肉组织冰冻切片后，然后观测：肌肉组织病理改变、免疫荧光法染IL-17。第二部分：实验性自身免疫性肌炎模型中Th17细胞的研究。首先为动物模型的观察：BALB/c小鼠被分为正常组和模型组。正常组：不进行任何干预。模型组：完全弗氏佐剂+1.5mg肌浆球蛋白，免疫接种每周一次，共2周，百日咳毒素腹腔注射2次，在第二次免疫后10天观察处理。通过肌力测定和组织学得分确定动物模型建立成功后，继续观察雷帕霉素的干预效果。雷帕霉素干预组：EAM模型建立后（第二次免疫后10天），开始给予雷帕霉素干预，连续每天腹腔注射2周；辅剂对照组（RAPA溶剂DMSO与生理盐水）：注射时间与方法同上，干预结束次日观察以下指标：肌力、病理组织学得分、免疫组织化学染IL-17以及荧光定量PCR检测肌肉和脾脏中RORγt mRNA水平。结果第一部分非炎性疾病病人肌肉组织排列规则，大小基本一致，很少见炎细胞浸润；PM患者肌纤维大小不一，可见大量炎细胞浸润，部分肌纤维出现萎缩，变性坏死。非炎性肌病患者肌纤维膜上不表达MHC-I，；但多发性肌炎患者MHC-I在肌纤维膜上表达强烈；加上CD8+T淋巴细胞主要侵入肌内膜，部分细胞围绕或侵犯未坏死的肌纤维。PM患者肌肉炎性组织有较多的IL-17阳性表达，主要分布于炎症性细胞，IL-17阳性细胞数量与肌组织炎症的严重程度呈正相关。但是在非炎性肌病肌肉组织IL-17无表达或很少表达。第二部分动物模型的观察模型组肌力（min）明显差于正常组（0.91±0.11、60±5，P<0.05）；组织学得分显示正常组无炎症，模型组有明显炎细胞浸润（0、2.47±0.27，P<0.05）。免疫组织化学研究显示模型组小鼠肌肉炎性组织有较多的IL-17阳性表达，主要分布于炎症性细胞，IL-17阳性细胞数量与肌组织炎症的严重程度呈正相关。RT-PCR：模型组肌肉组织中RORγt mRNA水平高于正常组。而脾脏组织中模型组RORγt mRNA水平低于正常组（组间P<0.05，有统计学差异）。雷帕霉素的干预效果肌力（min）：RAPA组比辅剂对照组有明显改善（5.13±0.53、1.56±0.18，P<0.05）；组织学得分：RAPA组仅有很少炎细胞浸润，而辅剂对照组仍有大量弥漫性炎细胞浸润（1.16±0.13、2.06±0.16，P<0.05）（组间P<0.05，有统计学差异）。免疫组织化学显示雷帕霉素干预后仅剩少量IL-17阳性表达。而在辅剂对照组炎细胞浸润的区域仍有较多IL-17阳性表达。RT-PCR：雷帕霉素组肌肉组织中RORγt mRNA水平低于辅剂对照组。而脾脏组织中雷帕霉素组RORγt mRNA水平高于辅剂对照组（组间P<0.05，有统计学差异）。结论1．多发性肌炎患者免疫组织化学结果提示肌肉炎性组织中存在较多的IL-17，此结果提示Th17细胞可能参与了PM的炎性发病过程。2．肌炎动物模型实验观察到EAM肌肉炎性组织中Th17细胞的增多和RORγt mRNA表达上调，也提示Th17细胞可能参与EAM发病过程。3．肌炎动物模型用RAPA干预两周后，观察到小鼠的全身状况明显改善，EAM肌肉组织中Th17细胞数量减少以及RORγt mRNA表达水平下调，此结果提示RAPA对于治疗EAM有很好的抑制作用；可能通过下调Th17细胞来发挥作用，RAPA的抑制作用对我们以后研究肌炎模型的治疗提供了线索。