背景:治疗性疫苗免疫是治疗人乳头瘤病毒(HPV)相关肿瘤的有前景的方法。然而,目前其在临床上功效甚微,很大程度上是由于受到肿瘤生长期间形成的免疫抑制机制的限制。FGF-2是重要的促肿瘤血管生成因子,其在多种肿瘤组织中过度积累,显著刺激肿瘤血管生成、肿瘤细胞增殖、迁移,而肿瘤组织血管增殖异常造成肿瘤组织厌氧微环境,进一步促进了免疫抑制细胞的分化、增殖以及向肿瘤组织的浸润。因此拮抗肿瘤组织中异常积累的FGF-2,对于抑制肿瘤血管形成、克服肿瘤免疫抑制、增强抗肿瘤免疫效应可能发挥重要作用。目的:本研究旨在通过主动免疫方式诱导机体持续存在的FGF-2抗体,以拮抗肿瘤过度表达与积累的FGF-2,揭示这一策略能否有效改善抗肿瘤免疫应答并协同性增强HPV16 E7特异性治疗性疫苗的功效,为肿瘤疫苗取得临床效力突破探讨新的策略。方法:通过基因重组技术,在乙肝核心抗原(HBcAg)病毒样颗粒(VLPs)表面呈递已鉴定的FGF-2 B细胞表位抗原肽,纯化制备重组VLP疫苗。在携带TC-1肿瘤的小鼠中单独或与HPV16 E7特异性疫苗联合进行治疗性免疫干预。结果:成功制备了 4个呈递不同FGF-2抗原肽(P3、P5、P11、H2)的VLPs,运用含有1mol/L尿素的PBS缓冲液有效溶解了聚集的VLPs,在蔗糖密度梯度离心中呈现典型的HBcAg VLPs行为,经凝胶过滤得到进一步纯化,含有30%山梨醇的PBS有效避免了尿素去除后VLPs的重新聚集。在荷瘤小鼠治疗性干预中,制备的重组VLP免疫产生了持久且高滴度的FGF-2特异性抗体应答。FGF-2-P3、P5、P11 VLP疫苗与HPV抗原特异性治疗性疫苗未呈现理想的协同抗肿瘤及抑制肿瘤生长作用;对于位于肝素结合结构域的FGF-2-P12 VLP,与单独的抗FGF-2 VLP及HPV抗原特异治疗性疫苗免疫相比,靶向FGF-2和E7的联合免疫显著抑制了肿瘤的生长,流式分析显示脾脏和肿瘤组中表达IFN-γ的脾细胞或效应CD8+T细胞(细胞毒性T淋巴细胞)的水平显着增加,脾脏和肿瘤组织中免疫抑制细胞如Tregs(调节性T细胞)和MDSCs(髓样来源的抑制细胞)的水平显著降低;免疫荧光显示联合免疫的小鼠肿瘤组织中浸润的CD8+T细胞显著增加,Gr-1+细胞显著降低。此外,免疫组化显示联合免疫的小鼠肿瘤中FGF-2和血管新生的水平显着降低,颗粒酶B和肿瘤细胞凋亡分子Casepase3水平显著升高。结论:尿素和山梨醇的联合运用,为具有聚集现象的VLPs纯化制备提供了一种有效的解决方案;HPV16 E7特异性治疗疫苗与靶向FGF-2的主动免疫相结合显著增强了 TC-1肿瘤小鼠的抗肿瘤免疫应答,为肿瘤免疫疗法提供了一种有前景的新策略。