目的:原核表达猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP7蛋白,建立间接ELISA法,可用于未免疫疫苗的猪群野毒感染监测;基于表面荧光法制备区分高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒与传统型猪繁殖与呼吸综合征病毒(CH-1a)的单克隆抗体,为建立区分高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒与传统型猪繁殖与呼吸综合征病毒(CH-1a)的血清学检测方法提供物质基础。方法:1、通过基因工程,蛋白纯化和ELISA等方法对NSP7蛋白进行表达,纯化,免疫学活性鉴定;通过间接ELISA法对NSP7蛋白的最佳包被量,最佳包被条件,血清最佳稀释倍数,最佳孵育时间等进行优化;应用建立的间接ELISA法检测实际样品并与IDEXX试剂盒进行符合率计算。2、通过小鼠免疫,细胞融合、杂交瘤细胞表面荧光筛选等方法制备稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,挑选能区分高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(TP、JN、QJ、LQ、JN)与传统型猪繁殖与呼吸综合征病毒(CH-1a)的细胞株;经SDS-PAGE、间接ELISA等方法对纯化的单抗的纯度、特异性、亚型、效价等进行分析鉴定。3、应用分子生物学技术将单抗4D5轻重链可变区基因进行提取和测序;利用Discovery studio 4.5软件对抗体4D5进行分子建模与对接预测单抗4D5针对的蛋白;间接ELISA法鉴定4D5与N蛋白的反应情况。结果:1、经过密码子优化后的NSP7蛋白可以可溶性形式表达;NSP7蛋白最佳表达温度为34℃,IPTG最佳诱导浓度为0.8 mmol/L,最佳诱导表达时间为7h;纯化的NSP7蛋白具有免疫学活性。2、成功建立了基于NSP7蛋白的间接ELISA法。与IDEXX试剂盒相比符合率达88.3%。3、共筛选出36株针对PRRSV的单克隆抗体细胞株,其中10株分泌的抗体结合能力较好;4D5能区分5株高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒(TP,QJ,LQ,TY,JN)与1株传统型猪繁殖与呼吸综合征病毒(CH-1a)。4、成功获取抗体4D5轻重链可变区基因;建立了4D5的抗体模型及其与N蛋白的分子对接模型;间接ELISA证明4D5能与N蛋白反应。结论:建立了基于NSP7蛋白的间接ELISA法,可用于未免疫疫苗的猪群野毒感染监测。筛选出了1株能区分5株高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒(TP,QJ,LQ,TY,JN)与1株传统型猪繁殖与呼吸综合征病毒(CH-1a)的单克隆抗体,为建立区分高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(TP,QJ,LQ,TY,JN)与传统型猪繁殖与呼吸综合征病毒(CH-1a)的血清学检测方法提供物质基础。