【摘 要】
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Rap2是Ras家族Rap亚族的成员之一,具有三种异构体,分别为Rap2a、Rap2b及Rap2c,参与调控多种细胞的基本生命活动。Rap2与Rap1同属于Rap亚族,它们在氨基酸序列上有60%同源性,因此Rap2
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Rap2是Ras家族Rap亚族的成员之一,具有三种异构体,分别为Rap2a、Rap2b及Rap2c,参与调控多种细胞的基本生命活动。Rap2与Rap1同属于Rap亚族,它们在氨基酸序列上有60%同源性,因此Rap2具有与Rap1相似的生物学功能。Rap2能够与Ras家族共有的下游效应因子相结合,而且Rap2还具有特异性的相互作用蛋白,如MINK、TINK、PARG1,通过与它们相互作用参与调控多种细胞信号通路。本文主要研究新的Rap2特异的相互作用蛋白。 本文首先利用免疫共沉淀和蛋白质谱分析的方法在稳定表达Rap2的NC65细胞系中研究未知的Rap2相互作用蛋白,发现在NC65细胞中Vimentin和H2B可以与Rap2相互作用。然后利用免疫荧光、免疫共沉淀以及酵母双杂交实验进一步验证Vimentin与Rap2、H2B与Rap2之间的相互作用关系。免疫荧光结果表明在NC65细胞中Vimentin与Rap2以及H2B与Rap2均有共定位的趋势,免疫共沉淀和酵母双杂交实验结果确定了Vimentin是Rap2的相互作用蛋白,并且Vimentin与Rap2之间发生间接相互作用。然而H2B与Rap2之间的相互作用关系需要进一步证实。最后利用划痕实验的方法研究Vimentin与Rap2共表达对细胞运动的影响,结果表明Vimentin过表达促进NC65细胞迁移,Rap2与Vimentin共表达也增强NC65细胞的运动能力。为进一步研究Rap2的功能及其作用机制提供基础。
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