硫化氢对尿源性脓毒血症肾细胞凋亡的影响

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目的复制尿源性脓毒血症兔模型;应用NaHS(H2S供体)干预,明确外源性硫化氢对尿源性脓毒血症急性肾损害的作用,探讨H2S在尿源性脓毒血症中对肾细胞凋亡、NF-κB、Bcl-2、Bax表达的影响,进而揭示H2S对尿源性脓毒血症所致肾细胞凋亡的影响。方法1、采取结扎家兔左输尿管,并向结扎近端输尿管内注入大肠埃希菌(ATCC25922),以建立因急性上尿路梗阻、感染而引发的兔脓毒血症模型;2、将48只健康的雄性家兔(体重:1.8-2.2Kg/只)随机分成4组,每组12只。对照组、假手术组、尿源性脓毒血症组(模型组);硫氢化钠治疗组(治疗组);3、每组实验动物按时间点划分为5个时间观测点:术前,术后12h、术后24h、术后36h、术后48h。分别于每个时间点测实验兔的肛温(RT)、呼吸(RR)、心率(HR);4、分别于手术前,手术后各时间点采血,用以行外周血常规(WBC、中性粒细胞)、肾功能(Cr、BUN)的测定;5、于手术后48小时取各组家兔肾脏组织行HE染色,于光学显微镜下,观察肾脏形态及其结构的改变,Tunel法检测肾脏组织细胞凋亡;应用免疫组化测定各时间点、各组家兔组肾脏组织中的Bcl-2、Bax的蛋白表达;Western-Blot法检测各组家兔肾脏组织NF-ΚB的蛋白表达。结果1.各组家兔体温、呼吸频率、心率比较:假手术组与对照组比较无明显差异(P>0.05);模型组明显高于对照组、假手术组(P<0.05),治疗组明显低于模型组(P<0.05)。2.血常规、肾功能化验结果表明:各组家兔术前血常规(白细胞、中性粒细胞)、肌酐(Cr)、尿素氮(Bun)比较,差异无统计学意义。术后血WBC、中性粒细胞;Cr、Bun结果:对照组与假手术组比较,差异无统计学意义(P>0.05);模型组明显高于对照组、假手术组(P<0.05);治疗组与模型组相比有下降趋势,有统计学意义(P<0.05)。3.病理形态:微观形态学改变:镜下(HE染色):模型组可见肾小球萎缩、变形,并可见大量炎性细胞浸润;治疗组较模型组上述变化有所减轻。4.免疫组化法检测,肾脏组织Bcl-2、Bax的蛋白表达:对照组、假手术组肾脏组织可见Bcl-2、Bax蛋白微弱表达;Bax蛋白表达在模型组最强,而Bcl-2蛋白在模型组表达微弱;治疗组较模型组Bax蛋白表达明显减弱,而Bcl-2蛋白表达明显增强。5.原位末端转移酶标记(Tunel)法,检测肾脏组织细胞凋亡:对照组、假手术组肾脏组织可见散在的少量的肾小管上皮细胞凋亡。模型组可见成片的细胞凋亡以及凋亡小体的形成,与对照组比较P<0.05。治疗组较模型组肾脏组织细胞凋亡显著减轻(P<0.05)。6. Western-Blot法检测NF-ΚB的蛋白表达:对照组与模型组比较: NF-ΚB蛋白表达无明显差异;对照组与模型组比较:模型组NF-ΚB蛋白表达显著高于对照组,于术后48小时差异显著,(P<0.05)有统计学意义;治疗组与模型组比较:模型组NF-ΚB蛋白表达显著高于治疗组,术后48小时差异显著(P<0.05)有统计学意义。结论硫化氢可抑制NF-κB及Bax表达,上调Bcl-2表达,减少肾脏细胞凋亡,减轻肾损害。
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