连翘茎为木犀科植物连翘Forsythia suspensa(Thunb.)vahl的干燥茎。连翘作为山西的道地药材,主要以果实入药,有清热解毒、消肿散结等功效,已经在中医药的发展历史中使用了2000多年。连翘在亚洲东部以及欧洲许多地区广泛分布,在国内主要分布于华西、华北、华中等地区。连翘茎为连翘的茎,其相关文献记载较少,在当代著作《中华本草》、《中药大辞典》中记载“连翘茎叶,味苦,性寒,功能:清热解毒,主治心肺积热”。在连翘种植和野生抚育过程中,为了提高连翘果实的结实率,在连翘主产区每年都要对连翘植株进行修剪,产生的大量连翘茎、叶被丢弃,造成巨大的资源浪费。本课题组前期研究表明,连翘茎中主要含有连翘苷、(+)-松脂素-β-D-葡萄糖苷、(+)-表松脂素-4ˊ-O-β-D-葡萄糖苷等成分,其提取物可以有效抑制金黄色葡萄球菌的繁殖,且抑菌活性优于老翘。目前连翘叶的利用已有许多研究报道,本课题组汪青波将连翘叶通过自身酶发酵,把连翘苷转化成连翘脂素,并且经过分离纯化技术,建立了连翘脂素的制备方法。本文利用发酵手段对连翘茎进行发酵,并且筛选了最佳的发酵条件,同时对比分析了发酵完成前后的成分差异,期望为连翘茎的开发利用提供理论基础。具体研究内容如下:1.利用高效液相色谱法,建立了用于测定连翘茎中连翘苷、牛蒡子苷元以及连翘脂素等木脂素类成分的HPLC含量测定方法,并进行了方法学验证。以4~10月不同时期采集的连翘茎为研究对象,对比分析了三种木脂素成分连翘苷、牛蒡子苷元以及连翘脂素的含量及变化。同时,还对连翘植株不同部位的木脂素类成分含量进行了对比分析。实验结果表明,本研究建立的含量测定方法具有良好的稳定性、重复性和准确性,可用于连翘茎中连翘苷、牛蒡子苷元、连翘脂素的含量测定。连翘茎中含有较丰富的连翘苷成分,并且4月和8月采集的连翘茎中连翘苷含量较高,分别为1.68%和0.72%。此外,连翘植株不同部位木脂素类成分含量测定结果表明,连翘叶中木脂素类成分含量较高,连翘果实与连翘茎中的含量相当。2.利用连翘茎固态自然发酵方法,以连翘脂素的含量为指标,通过单因素条件考察和正交实验考察了发酵温度、原料含水量以及发酵时间对连翘脂素生成量的影响,确定了连翘茎自然发酵的最佳条件,并进行了重复验证实验。研究结果显示,连翘茎的最优自然发酵条件为:原料含水量75%、发酵温度35℃、发酵时间3 h时。三次重复试验显示发酵产物中连翘脂素的平均含量为3.83 mg/g,平行实验的RSD值为1.10%,说明该发酵条件比较稳定,可靠性较高。另外,研究发现连翘茎发酵前后成分发生了很大变化,需要进一步研究。3.采用UPLC、LC-MS分析方法对连翘茎发酵前后的化学成分进行了分析鉴定,并利用柱层析分离技术对连翘茎发酵后产生的特异性化学成分进行了分离、纯化。研究结果发现连翘茎发酵前后的化学成分不仅发生了含量变化,并且产生了新的化学成分,初步验证为松脂素单甲醚和罗汉松脂素。