论文部分内容阅读
本研究采用SSR标记技术对来源于中国科学研究院郑州果树研究所的19个观赏桃品种和北京市农林科学院的3个观赏桃品种进行了亲缘关系分析。本文主要探讨了观赏桃的DNA提取方法,SSR-PCR的体系优化,银染技术,SSR引物的筛选以及22个观赏桃品种的亲缘关系分析。主要成果如下：(1)实验技术体系构建根据文献比较和实验验证,最终确定以刘燕(2011)的改良CTAB法进行总DNA的提取。采用L25(56)正交设计方案，确定25μl体系“模板DNA(20ng/μl)3μl,引物(10μM)1.0μl,Mg2+(25mM) 2.0μl,dNTPs (2.5 mM) 3.0μl, TaqDNA聚合酶(2.5 U/μ1) 0.8μl,10xBuffer (free Mg2+) "作为SSR-PCR反应体系。通过文献比对和实验摸索,确定了银染方法：先用流水冲洗带凝胶的短玻璃板10秒钟,然后放置10%冰醋酸中固定30分钟,再用流水冲洗半秒钟,置于1‰染色AgNO3 20分钟,再用流水快速冲洗,最后放置于1.5% NaOH和0.25%甲醛中显色。(2)SSR引物筛选从E Dirlewanger等人(2002)报道的41对SSR’引物筛选出12对多态性高的单位点扩增引物。12对引物共扩增出44个多态性条带,多态性比例均为100%,每对引物扩增出2-5条多态性条带,平均每对引物扩增出3.7条多态性条带。(3)22个观赏桃品种的亲缘关系分析利用NT SYS 2.10E软件进行聚类,分析结果表明,在相似系数为0.66时,22个观赏桃品种被聚为直枝型、矮化型和垂枝型3类。直枝型包括‘红叶碧桃’、‘报春’、‘洒红’、‘红绣球’、‘单粉’、‘春艳’、‘二色桃’、‘月季桃’、‘锦春’和‘贺春’；矮化型包括‘寿红’、‘红菊花’、‘菊花桃’、‘满山红’和‘满天红’；垂枝型包括：‘单瓣垂枝’、‘垂枝1’、‘垂枝2’、‘白重瓣垂枝’、‘朱粉垂枝2’、‘朱粉垂枝1’和‘红叶垂枝’。结果支撑了把枝型作为比花型更高级的分类级别,同时花型、花色、叶色性状之间存在交叉,其中交叉程度最轻的是花型。本文供试的22个观赏桃可分别以枝型和花型为第一、二级分类标准进行大致分类。