【摘 要】
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霍乱弧菌中新发现一个开放阅读框,其编码的蛋白与大肠杆菌中发现的冷休克蛋白A(cold shock protein A,CspA)有80i以上的氨基酸同源,该蛋白在不同细菌中均有发现并高 度保护,
【出 处】
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中国预防医学科学院 中国疾病预防控制中心
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霍乱弧菌中新发现一个开放阅读框,其编码的蛋白与大肠杆菌中发现的冷休克蛋白A(cold shock protein A,CspA)有80i以上的氨基酸同源,该蛋白在不同细菌中均有发现并高 度保护,在大肠杆菌中表现为低温诱导.以霍乱弧菌cspA基因呈单拷贝存在,未发现其他同源序列.PCR克隆霍乱弧菌β-半乳糖苷酶(β Gal)基因lacZ,体外缺失2kb并插入卡那霉素 抗性基因(kan)作为选择性标记,βGal活性被灭活.利用自杀质粒pKTN701和pCVD442作为载体,采用体内同源重组原理,缺失霍乱弧菌染色体lacZ基因,并灭活βGal活性,构建569B 的lacZ缺失株569B(△lacZ::kan).为下一步在霍乱弧中检测cspA-lacZ融合表达βGal活性 ,消除宿主菌βGal活性的影响,提供了合适的宿主菌.同时也有利于今后在霍弧菌中,利 用lacZ融合表达技术研究其他新基因及其调控.该研究首次在霍乱弧菌中明确了cspA为冷休克基因,该基因在霍乱单拷贝存在,没有发现其他同源序列.其最适诱导温度为20℃.该基因低温诱导表达特性的发现,为今后从基因和蛋白水平研究霍乱弧菌越冬机制,奠定了基础.
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