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研究背景随着对妇女健康普查的推广,宫颈癌的发病率和死亡率都已大大下降,但在妇女人群中仍然是位居第二的常见恶性肿瘤。许多研究表明,宫颈癌的发病与人类乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)有关,并引起了人们的高度重视。至今,很多国家已经展开了大规模的HPV普查工作,现有数据表明HPV各个亚型的感染存在地区分布差异。我国地广、人口多,虽然也有部分地区报道了HPV亚型分布情况,但覆盖范围还远远不足。本研究目的在于探讨广西地区部分宫颈疾病患者HPV感染及HPV亚型的流行状况,从而有利于宫颈癌的防治。材料与方法1.收集宫颈病变石蜡组织标本共304例,其中宫颈尖锐湿疣29例、宫颈炎34例、CIN(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅰ级28例、CINⅡ级25例、CINⅢ级25例、宫颈鳞状细胞癌131例、宫颈腺癌32例。2.采用基因芯片技术对304例标本进行23种HPV基因型分型检测,分析各种宫颈病变中HPV感染情况以及亚型分布规律。3.从304例石蜡标本中随机抽选123例(尖锐湿疣29例、宫颈炎16例、CINⅠ级13例、CINⅡ级11例、CINⅢ级12例、鳞癌27例、腺癌15例)进行免疫组化(immunohistochemistry,IHC)染色,对比分析免疫组化与基因芯片的敏感性。4.从总体样本中随机选取22例进行基因测序(gene sequencing),其中包括各组宫颈病变的样本,测序病例的HPV基因型包括基因芯片检测最常见亚型,对比两种方法所检出的HPV亚型,分析基因芯片技术对HPV分型的特异性。结果1.广西地区宫颈疾病与HPV感染的关系应用基因芯片技术,在304例宫颈病变中,共检出HPV感染241例,感染率79.3%。各病变组的HPV感染率如下:尖锐湿疣27/29(93.1%);宫颈炎6/34(17.6%);CINⅠ级13/28(46.4%);CINⅡ级16/25(64.0%);CINⅢ级24/25(96.0%);宫颈鳞癌129/13(198.5%);宫颈腺癌26/32(81.3%)。除了尖锐湿疣以外,各组HPV感染率随宫颈病变级别上升而升高(P<0.05)。2.广西地区宫颈疾病患者HPV亚型的感染规律基因芯片检测的23种HPV亚型中共检出了18种亚型(包括14种高危型和4种低危型)。其分布规律为:HPV16感染率最高136/304(44.7%),占所有HPV阳性例数的136/241(56.0%);其余的感染型别(从高到低)分别为:高危型HPV18(12.8%), HPV58(5.9%), HPV52(3.9%), HPV33(3.6%);低危型HPV11(7.6%)和HPV6(3.9%)。各宫颈病变HPV亚型的分布:尖锐湿疣组以低危亚型为主,HPV11阳性20/29(69.0%),HPV6阳性9/29(31.0%);CIN组HPV16阳性22/78(28.2%),HPV58阳性13/78(16.7%),HPV33阳性6/78(7.7%),HPV18阳性5/78(6.4%);宫颈鳞癌组HPV16阳性103/131(78.6%),HPV18阳性15/131(11.5%),HPV59阳性7/131(5.3%),HPV58,33,31阳性均为4/131(3.1%);腺癌组HPV18阳性19/32(59.4%),HPV16阳性7/32(21.9%),HPV52阳性2/32(6.3%)。3.广西地区宫颈病变HPV单一感染及多重感染规律本研究检出单一感染200/241(83.0%);双重感染37/241(15.4%)(包括30例单纯高危型的双重感染,以HPV16,18双重感染最常见9/30;1例HPV6,11单纯低危型的双重感染;6例高危合并低危型HPV复合感染);三重感染3/241(1.2%)(1例HPV16,33,59单纯高危型的三重感染;2例高危合并低危型HPV复合感染,分别为HPV6,11,52和HPV6,11,58);四重感染1/241(0.4%)为高、低危亚型HPV11,43,51,66复合感染。各宫颈病变的单一感染和多重感染如下:尖锐湿疣单一感染占感染例数的22/27(81.5%),双重感染2/27(7.4%),三重感染2/27(7.4%);四重感染1/27(3.7%);宫颈炎单一感染6/6(100%);CINⅠ单一感染12/13(92.3%),三重感染1/13(7.7%);CINⅡ单一感染15/16(93.8%),双重复合感染1/16(6.2%);CINⅢ单一感染17/24(70.8%),双重感染7/24(29.2%);鳞癌单一感染106/129(82.2%);双重感染23/129(17.8%)。腺癌单一感染22/26(84.6%),双重感染4/26(15.4%)。多重感染在尖锐湿疣中以单纯低危型或低高危亚型复合多重感染常见,在CIN和宫颈癌中以单纯高危型或高低危亚型复合多重感染常见。4.免疫组化与基因芯片对HPV检出率的比较随机的123例免疫组化检出HPV阳性63例(50.4%);而基因芯片技术对相应病例的HPV检出阳性例数为95例(77.2%)。5.基因测序验证基因芯片所检出的HPV基因型随机抽取的22例测序,序列与基因库序列对比相似性大于96.0%,检出型别与基因芯片所检出的HPV型别相一致。结论1.广西地区宫颈疾病的发生与HPV感染密切相关,HPV感染率极高,且随着宫颈病变级别的上升而升高,宫颈鳞癌中HPV阳性率几乎达100%;2. HPV16,18,58,52,33为广西前五种最常见的高危亚型,HPV6,11是广西最常见的低危亚型。HPV16居首位,其次在CIN中是HPV58,而在宫颈癌中为HPV18,其中宫颈腺癌与HPV18关系更为密切;3.高危型HPV与宫颈癌及CIN密切相关,而低危型HPV与宫颈尖锐湿疣关系密切;4. HPV感染多为单重感染136/241;多重感染中,四重感染1/241,三重感染3/241,双重感染43/241,其中单纯低危型多重感染或者高低危亚型复合感染多见于尖锐湿疣,而单纯高危型多重感染常见于CIN和宫颈癌;5.基因芯片技术对HPV检测敏感性高于免疫组化,而且能够一次对HPV的23种亚型进行分型检测,通量大,特异性强,可应用于石蜡组织标本检测,辅助临床病理诊断,指导临床治疗和预测疾病愈后。