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乳汁是哺乳动物出生后的主要的营养来源,乳汁中含有复杂的营养成分,能保证新生儿的生长和发育。乳汁中含有miRNA,因其装载于exosome中或与其他蛋白相结合而免受RNA酶的降解。乳中miRNA能否被人或动物肠道吸收仍存在着争议。为验证乳中miRNA是否能被动物体所吸收,本研究以牛乳和猪乳中的miRNA为对象,分别在活体水平和细胞水平上开展实验,寻找miRNA吸收的规律性,并探讨乳exosome对小鼠免疫功能的影响。主要结果如下:(1)通过前期生物信息学的筛选和荧光定量的验证,发现有6个miRNAs(miR-2284x,miR-1224,miR-2291,miR-7134,miR-1343,miR-2478)的含量在牛乳和猪乳乳清之间有显著差异(p<0.05),2个(miR-500,miR-223)无显著差异(p>0.05),表明不同物种乳中miRNAs的表达谱存在一定的差异。分组对初生仔猪饲喂两种乳汁并定期分离出血清进行检测,发现上述miRNAs中的4个(miR-2284x,miR-2291,miR-7134,miR-1343)在两组血清中的含量有显著差异(p<0.05),4个(miR-2478,miR-1224,miR-500,miR-223)无显著差异(p>0.05)。(2)通过一系列离心分离得到两种乳的exosome以及上清液。荧光定量分析发现,部分miRNAs富集在exosome中,部分则富集在上清中,且两种乳中miRNAs的分布有所差异,提示乳清中miRNAs的分布可能存在物种特异性。把从两种乳中分离出来的exosome和上清分别添加到体外培养的IPEC-J2细胞中,结果显示细胞经处理后相关miRNAs的含量有所提高,即处理样品中miRNA浓度越高,处理细胞后细胞中相应miRNA的含量越高。此外,对乳清中Ago2蛋白、NPM1蛋白、高密度脂蛋白进行免疫共沉淀并以荧光定量进行检测,结果显示三种蛋白中均存在一定量的miRNAs。(3)用猪乳exosome和上清分别对一月龄小鼠进行灌胃。荧光定量结果显示,所检测的6个miRNAs当中有2个在实验组小鼠的小肠和血清中的含量均显著高于对照组(p<0.05),2个只在小肠中的含量显著高于对照组(p<0.05),2个只在血清中的含量显著高于对照组(p<0.01)。(4)分别用牛乳exosome、牛乳上清、猪乳exosome和猪乳上清对一月龄小鼠进行灌胃。ELISA结果显示,在血清中,牛乳上清能显著增加IgA、TNF-α、IFN-γ的表达水平(p<0.01;p<0.05;p<0.01),猪乳exosome和牛乳exosome均能显著增加IFN-γ的表达水平(p<0.01;p<0.05),猪乳exosome、牛乳exosome和牛乳上清均能显著提高IFN-γ/IL-4的比例(p<0.01;p<0.05;p<0.01);在回肠中,猪乳exosome和牛乳上清均能显著增加IFN-γ的表达水平(p<0.05;p<0.05)。mRNA荧光定量结果显示,在回肠,牛乳上清能显著增加TLR4 mRNA的水平(p<0.01);在脾脏,猪乳exosome能显著增加T-bet mRNA的水平(p<0.05),猪乳、牛乳上清均能显著降低GATA-3 mRNA的水平(p<0.05;p<0.05)。以上结果表明,乳中部分miRNAs可被吸收进入仔猪血清中;乳exosome和上清中的miRNAs都能被小肠上皮细胞所吸收;免疫沉淀结果显示乳上清中部分miRNAs与Ago2蛋白、NPM1蛋白、高密度脂蛋白相结合;乳中miRNAs可被吸收进入小鼠肠道组织中,而其中一部分miRNAs则进一步转运到血液当中;除乳上清外,乳中exosome也能在一定程度上提高小鼠的免疫功能。本研究为乳汁中miRN As能被哺乳动物所吸收提供了更丰富的试验依据,同时为探究乳exosome提高哺乳动物免疫功能提供了试验依据。